甲基丙二酸

甲基丙二酸 (Methylmalonic acid，MMA)是一种二羧酸，是丙二酸的甲基化衍生物，丁二酸（琥珀酸）的同分异构体。生物体内，甲基丙二酸与辅酶A通过硫酯键结合成甲基丙二酰辅酶A，再通过甲基丙二酰辅酶A变位酶异构化为琥珀酰辅酶A（维生素B12为辅酶），以这种方式进入三羧酸循环，这是有机体回补反应之一。

甲基丙二酸在血液中的浓度通常由气相色谱法或质谱法测得，在健康人中为73-271 nmol/L。甲基丙二酸血症是先天性有机酸代谢异常中最为常见的疾病之一，属于常染色体隐性遗传病。该病常见的临床症状表现为嗜睡、生长发育迟缓、发作性呕吐、脱水、呼吸困难、肌张力低下，少见症状还包括智力低下、肝大和昏迷等。自1967年首次报道该病以来，国内外学者采用不同的方法对患者体液中MMA进行了定性定量分析，以便为临床确诊提供技术服务。

一种特异性强、准确度和灵敏度高、分析时间短的检测血液中甲基丙二酸含量的方法如下：

步骤1：用移液器移取标品和内标溶液，涡旋仪混匀；同时平行移取待测样本和内标溶液涡旋混匀；

步骤2：向上述混合液中加入基质溶液(4％的牛血清蛋白溶液或空白血清溶液)，涡旋混匀；

步骤3：加入PH＜7的小极性醚进行萃取，充分混匀并高速离心；

步骤4：取部分上清液，于氮吹仪上氮气吹干；

步骤5：加入衍生试剂(饱和的酸性醇溶液)，涡旋混匀，密封，加热65℃，20min衍生；

步骤6：衍生完成后再次加热吹干溶剂；

步骤7：加入流动相复溶液复溶(含1-5‰甲酸铵或乙酸铵的醇水溶液或乙腈水溶液，醇水溶液或乙腈水溶液中醇或乙腈的体积百分比浓度为20-80％)，充分混匀；

步骤8：经超声萃取一段时间后，充分混匀并高速离心；

步骤9：取上清溶液，由液相自动进样器进样，经液相色谱柱的色谱分离，经质谱分析，最终定量分析血液或尿液中甲基丙二酸(MMA)的含量。