NCTC1469 小鼠正常肝细胞

贴壁；上皮细胞样 NCTC1469细胞于1952年从雄性2日龄C3H/An品系小鼠的肝脏中分离出来，H-2k阳性。NCTC1469细胞对水泡性口炎病毒、人脊髓灰质炎病毒1敏感。NCTC1469细胞鼠痘病毒呈阴性，可以用于3D细胞培养、高通量筛选、毒理研究。 1952年建系，源于正常C3H/An小鼠的肝脏组织，表达H-2K抗原,鼠痘病毒阴性。 圆形/上皮细胞样(圆形或不规则形) 1.尽量吸干净T25瓶原培养基；2.加3-4ml 常温PBS轻轻润洗细胞10-20s，吸走润洗的PBS；3.T25瓶加1ml左右胰酶，轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层；4.将培养瓶放入37度培养箱消化；5.消化到细胞间隙变大，但未完全脱落时加2-3ml完全培养基终止胰酶消化；6.混匀细胞，900rpm离心3-5min，弃上清；7.加新的完全培养基轻轻重悬细胞，均匀分到新的培养瓶里；8.补足完全培养基，将培养瓶放回培养箱静置培养； NCTC 1469(小鼠正常肝细胞)“一代”指从细胞接种到分离再培养的一段期间，与细胞世代或倍增不同。在一代中，细胞培增3～6次。细胞传代后，一般经过三个阶段：游离期、指数增生期和停止期。常用细胞分裂指数表示细胞增殖的旺盛程度，即细胞群的分裂相数／100个细胞。一般细胞分裂指数介于0.2％～0.5％，肿瘤细胞可达3～5％。接种2～3天分裂增殖旺盛，是活力zui好时期，称指数增生期(对数生长期)，适宜进行各种试验。 1:2-1:4（具体情况视细胞生长速度及密度决定） 1.接种：用含10％胎小牛血清得培养液配成单个细胞悬液，以每孔1000－10000个接种到96孔板，每孔体积200ul.
2.NCTC 1469(小鼠正常肝细胞)培养：同一般培养条件，培养3－5天（可根据试验目的和要求决定培养时间）。
3.呈色：培养3－5天后，每孔加MTT溶液（5mg/ml用PBS 配)20ul. 继续孵育4小时，终止培养，小心吸弃孔内培养上清液，对于悬浮需要离心后再吸弃孔内培养上清液。每孔加150ul DMSO，振荡10分钟，使结晶物充分融解。
4.比色：选择490nm波长，在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值，记录结果，以时间为横坐标，吸光值为纵坐标绘制NCTC 1469(小鼠正常肝细胞)生长曲线。 肝；自发永生；C3H/An；2日龄 贴壁细胞