抑肽素 A

Pepstatin A对天冬氨酸蛋白酶比如蛋白质，组织蛋白酶D和E表现出有效的抑制作用。在HIV感染的H9细胞中，pepstatin A抑制部分细胞内HIV gag蛋白质的合成，而对HIV感染的细胞没有显著毒性。 Pepstatin A通过阻断ERK信号并抑制NFATc1的表达抑制破骨细胞的增殖。

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一般步骤： 4.2 通用程序A：树脂加载 在烧结的聚丙烯注射器中手动进行固相肽合成。将2-氯三苯甲基氯（CTC）树脂预先浸入二氯甲烷（DCM）中15分钟并排干。加入0.4M N,N-二异丙基乙胺（DIPEA）的DCM溶液中的第一个氨基酸，搅拌混合物3小时。排出溶剂后，用17:2:1 DCM/甲醇（MeOH）/DIPEA（3×3mL×5分钟）溶液处理树脂，然后用8:1:1 N,N-二甲基甲酰胺（DMF）/DIPEA/乙酸酐（2×3mL×10分钟）溶液封端任何游离的2-CTC树脂接头。最后用DCM（2×3mL×1分钟）、DMF（2×3mL×1分钟）、DCM（2×3mL×1分钟）和DMF（2×3mL×1分钟）洗涤树脂。 4.3 通用方法B：Fmoc脱保护 用10%哌啶的DMF（2×3mL×3分钟）溶液搅拌树脂，随后用DMF（3×3mL×1分钟）、DCM（3×3mL×1分钟）、DMF（5×3mL×1分钟）洗涤。将脱保护的溶液合并并适当稀释（100倍，0.05mmol树脂负载量）。通过测量哌啶-富烯加合物与DMF中的10%哌啶作为参比（λ=301nm;ε=7800M-1cm-1）的吸光度来估算树脂负载量。 4.4 通用方法C：与HBTU的肽偶联 在最小量的DMF中制备由适当的Fmoc保护的氨基酸（相对于树脂加载3当量）和2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸盐（HBTU）（相对于树脂加载2.9当量）的溶液。加入DIPEA（相对于树脂加载量为6当量）并将树脂搅拌1.5小时。然后排出树脂并用DMF（3×3mL×1分钟）、DCM（3×3mL×1分钟）和DMF（5×3mL×1分钟）洗涤。 4.5 通用方法D：与HATU的肽偶联 在最小DMF中制备由适当的Fmoc保护的氨基酸（相对于树脂加载3当量）和1-[双(二甲氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐（HATU）（2.9当量与树脂加载相关）的溶液。将DIPEA（6当量与树脂负载量的关系）加入溶液中，立即将混合物加入树脂中并搅拌。基于偶联的残基改变反应时间：Phe（NMe）和Ala（2×2小时）；Thr和Sta（1×2小时）；Asn、Leu、D-Val和L-Val（2×2小时）；DMVal（3×3小时）。一旦反应完成，排出树脂并用DMF（3×3mL×1分钟）、DCM（3×3mL×1分钟）和DMF（3×3mL×1分钟）洗涤。 4.6 通用方法E：与DIC的肽偶联 制备由适当的Fmoc保护的氨基酸（相对于树脂加载1.5当量）、1-羟基苯并三唑（HOBt）（相对于树脂加载1.5当量）和N,N'-二异丙基碳二亚胺（DIC）（1.5当量相对于树脂负载量）在最小DMF中的溶液。将该溶液搅拌20分钟，然后加入树脂中并搅拌过夜。排出树脂并用DMF（3×3mL×1分钟）、DCM（3×3mL×1分钟）和DMF（5×3mL×1分钟）洗涤。应用偶联氟化氨基酸后下一个氨基酸的双偶联。 4.7 通用程序F：树脂裂解 在最后的Fmoc脱保护后，用DMF（3×3mL×1分钟）和DCM（3×3mL×1分钟）洗涤树脂，然后真空干燥。用95:2.5:2.5三氟乙酸（TFA）/三异丙基硅烷（TIS）/H2O（3mL）溶液搅拌树脂2小时。排出树脂并用上述相同的TFA混合物洗涤（2×3mL×1分钟）。将合并的裂解溶液在氮气流下浓缩。加入乙醚，倾去上清液（3×）。然后将残余物真空干燥，得到粗制线性肽。

参考文献：

[1] Tetrahedron, 2018, vol. 74, # 12, p. 1278 - 1287