TM3小鼠睾丸间质细胞

TM3小鼠睾丸间质细胞来源于雄性小鼠睾丸间质的上皮细胞样贴壁细胞，生长培养基：DMEM/F12＋5%HS＋2.5%FBS＋1%P/S。 TM3细胞在LH作用下cAMP产量升高，但对促卵泡激素没有响应。TM3细胞对LH的响应持续时间与血清批次有关；在LH存在下，TM3细胞可以代谢胆固醇。 TM3细胞是从11-13天雄性小鼠分离的Leydig细胞。TM3细胞在LH作用下cAMP产量升高，但对促卵泡激素没有响应。TM3细胞对LH的响应持续时间与血清批次有关，在LH存在下，TM3细胞可以代谢胆固醇。TM3细胞表达前列腺素F2a、表皮生长因子（EGF）、黄体生成素（LH）受体、雄激素受体、雌激素受体、孕酮受体，经检测鼠痘病毒阴性。TM3细胞可以用于3D细胞培养。 1） 来源：小鼠，睾丸间质
2） 形态：上皮细胞样，贴壁生长

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备DMEM/F12培养基；优质胎牛血清，2.5%；马血清，5%；双抗，1%。注：只使用单一血清培养，无法保证细胞状态。

2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入250px皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

上皮细胞样(多角形或梭形) 1.尽量吸干净T25瓶原培养基；2.加3-4ml 常温PBS轻轻润洗细胞10-20s，吸走润洗的PBS；3.T25瓶加1ml左右胰酶，轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层；4.将培养瓶放入37度培养箱消化；5.消化到细胞间隙变大，但未完全脱落时加2-3ml完全培养基终止胰酶消化；6.混匀细胞，900rpm离心3-5min，弃上清；7.加新的完全培养基轻轻重悬细胞，均匀分到新的培养瓶里；8.补足完全培养基，将培养瓶放回培养箱静置培养； 1:2-1:4（具体情况视细胞生长速度及密度决定） 睾丸间质；自发永生；雄性 贴壁细胞