从避坑到精通—攻克细胞污染及培养难题

在10月21日普诺赛直播间中，陶老师为大家带来了《从避坑到精通：攻克细胞污染及培养难题》的专题课程。

直播回放查看方式：

① 可在网站“视频栏目”查看

② 可在“武汉普诺赛”微信视频号查看；

③ B站搜索“普诺赛生物”，点击最新视频观看学习。

每一份好奇心都是推动科学进步的力量，针对大家在直播中提出的问题，我们特意邀请陶老师为大家进行深入解答。

另外，我们诚挚地欢迎大家在评论区畅所欲言。无论是实验技术问题还是感兴趣的课程主题，我们都将倾听您的每一个意见并积极回应，也会根据大家的需求定制专题讲座。感谢您的参与和关注！

直播问题解答

问：在消杀试剂的时候，血清能照紫外吗?

答：不建议，血清里面的部分组分照紫外后可能会降解，从而影响血清的品质。

问：消化的时候发现胰酶消化好长时间消化不下来，有什么好的建议吗?

答：胰酶消化之前提前用PBS润洗细胞，去除完培里面血清对胰酶的消化抑制作用；
胰酶使用前提前复温，因为胰酶有一定的工作温度，通常建议从冰箱拿出来后室温复温半小时以上；
关注胰酶开封时间，胰酶开封时间太久的话或者快用完的胰酶，消化效果会受到影响。

问：从一个品牌的血清换成另一个品牌时，要过渡吗?

答：建议最好是过渡下。建议用原先血清配的完培和新血清配的完培，按一定比例的过渡（比如2:1,1:1,1:2）。

问：有支原体感染的图片吗?细胞会变成什么样?

答：支原体因为直径特别小，常规的光学显微镜是没法观察到的，得进行支原体检测（比如PCR检测法）。虽然支原体污染后可能会有细胞拉丝，细胞不长，细胞空泡等异常现象，但如果出现这些异常现象的话不等同于支原体污染，还是得进行支原体检测来判断是否支原体污染了。

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图1. B16-F10细胞支原体污染形态（客户反馈实例）

图2. 细胞支原体污染示例图（来源于《细胞学堂 | 常见细胞污染类型及预防办法》）

问：有资料说，加抗生素会让我们忽略隐形污染，那养细胞到底加不加抗生素？

答：正常情况培养的话，还是比较建议加上双抗来进行培养的。如果实验室环境很好，也有一些后续实验的需求不能加抗生素（有些转染试剂的厂家不建议加抗生素），那养的时候可以不用添加抗生素。但如果对操作、环境没有太大的把握，或者没有特殊实验需求，还是可以加上抗生素来进行预防。

问：看到有种说法，血清里有磷酸钙显微镜下观察像小黑点，做布朗运动可以活动，是正确的吗？如果是，怎么区分它和微生物污染？

答：正确的，血清里面是会有一些磷酸盐和纤维蛋白的析出。磷酸钙在倒置显微镜下像小幅振动的小黑点，容易被误认为是微生物污染，但这些颗粒实际上是血清沉淀并不是污染。由于在37℃的温度下培养，会加剧磷酸钙颗粒产生，故空培血清验证污染的方法也不太直观。

我们可以通过将血清接种在细菌培养基上进行培养，观察是否存在细菌增殖，并且进行革兰氏染色，用油镜观察直接判断是否为微生物污染。

问：“布朗运动”是什么意思？黑点小范围内颤动算吗？

答：布朗运动（Brownian motion）：悬浮在液体或气体里的微小颗粒（直径一般 < 1 µm）被周围热运动分子不停地、随机地撞击，从而表现出永不停歇、无规则、原地小范围抖动的现象。

核心要点：颗粒必须足够小; 运动是随机的、连续的，只看得到“颤”而没有固定方向或长距离位移; 温度越高、颗粒越小，颤动越剧烈。因此，“黑点在原地小范围内颤动”正是布朗运动的典型表现；不过仅据此不能判定它是生物污染，因为任何微小颗粒（细胞碎片、细胞分泌物等）都会做同样的布朗运动。

普诺赛还将为您带来一系列专业直播课程，从基础到进阶，深度解析实操难题，助您解决实际操作中的难题，欢迎锁定我们直播间