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发布人：武汉普诺赛生命科技有限公司
发布日期:2025/12/5 15:00:53
在免疫学研究领域，RAW 264.7细胞作为重要的小鼠巨噬细胞系，一直是研究先天免疫、炎症反应和药物递送的理想模型。然而，由于RAW 264.7细胞的天然吞噬特性，转染效率低，同时现有转染试剂的高毒性也长期困扰着研究人员。如今，随着mRNA转染技术的突破，这一困境逐渐被解决。本期细胞学堂将带大家深入认识RAW 264.7细胞，并分享实现高效mRNA转染的实用策略。
RAW 264.7细胞源于Abelson小鼠白血病病毒诱导的雄性BALB/c小鼠肿瘤，是一种巨噬细胞样细胞系，具有独特的功能特性：
不规则形态，圆形为主，少量梭型细胞；
可表达整合素受体（CD49d和CD11b），能与炎症血管内皮组织中过度表达的VCAM-I和ICAM-I受体相互作用，具有较强的吞噬能力；
能够分泌多种炎症因子和趋化因子；
能够胞饮中性红并吞噬乳胶颗粒与酵母聚糖，并且可以抗体依赖性地分解绵羊红血球与肿瘤靶细胞。
凭借贴壁生长、增殖快、功能谱完整的优势，RAW 264.7被称为来自小鼠腹腔的“巨噬精灵”，成为炎症与免疫研究舞台上的常青树。它能对脂多糖、酵母聚糖作出敏锐应答，并通过TLR-NF-κB、NLRP3炎症小体、破骨细胞分化等通路协调运转，从而被广泛应用于病原体-宿主互作、纳米药物评价以及核酸疫苗的体外筛选。此外，基于RAW 264.7细胞膜制备的仿生纳米囊泡也已成为动脉粥样硬化治疗的研究热点。
RAW 264.7也是一种“娇气”的细胞，培养过程中常面临以下挑战：
对血清品质极为敏感，劣质胎牛血清中的高内毒素或脂蛋白会诱导其迅速分化，长出坚硬的多角触角，贴壁牢固却难以再转染；
RAW 264.7本身贴壁不牢，换液时若用PBS冲洗，细胞容易脱落；
胰酶消化不适用，任何消化尝试都会激活信号通路，导致实验背景信号升高，干扰对实验结果的判断。
因此，培养RAW 264.7更像是一场“温柔对话”。培养传代建议如下：
使用RAW 264.7细胞专用培养基培养；
当细胞密度达70-80%时进行传代，操作时可轻轻吹打使之悬浮，必要时使用细胞刮；
换液时直接补加预热至37℃的培养基，避免任何冷刺激；
使用低代次（P3–P5）细胞进行冻存，并在液氮中留存“年轻”种子，定期检测支原体，可有效维持其未分化状态与转染可塑性。
RAW 264.7的核膜屏障与溶酶体清除机制使传统质粒DNA难以有效表达，外源DNA的引入会激活Toll样受体9（TLR9）途径，导致细胞因子产生和一氧化氮释放，进而影响细胞状态和实验结果的可靠性。近年来，随着修饰核苷酸与高效脂质体的出现，mRNA递送成为破解难题的钥匙。
普诺赛®推出Mergene1000® RAW 264.7细胞专用mRNA转染试剂，具有以下优势：
能够直接将mRNA递送到细胞质中进行表达，从而避免了转录调控作用及进入细胞核的限制；
专为RAW 264.7细胞设计，实现较高转染效率；
毒性低、稳定性好；
操作简单易行、重复性好。
其使用方法如下（图1）：
图1. 转染试剂操作流程示意图
1、细胞准备
以24孔板为例，转染前一天，每孔加入500 μL RAW 264.7细胞专用培养基，接种1.2×105个细胞/孔，细胞培养12 h，可针对细胞实际状态适当调整培养时间，使转染时细胞密度达到70%-90%的融合度。
2、细胞转染
准备1个无菌离心管，加入50 μL DMEM高糖培养基，取0.6 μL Mergene1000® RAW 264.7细胞专用mRNA转染试剂至添加好培养基的管中，轻轻吹打混匀；再向上述转染试剂稀释液中加入0.2 μg mRNA，轻轻吹打混匀。将上述稀释液室温静置5-10 min后逐滴加到细胞中，采用8字法混匀细胞培养板，放置于37℃，5%CO2培养箱中培养。培养12-24 h后检测基因表达。
3、转染效果展示
使用Mergene1000® RAW 264.7细胞专用mRNA转染试剂和 T品牌L3000，分别将绿色荧光蛋白基因（EGFP）导入RAW 264.7细胞，并通过显微镜和流式细胞术进行转染效率评估（图2）。
图2. RAW 264.7细胞转染效率检测
（注：实验同步进行，转染条件均按照各品牌说明书执行，结果仅供参考）
四、常见问题解答
1、为什么RAW 264.7细胞转染效率低？
RAW 264.7作为专业吞噬细胞，对外来DNA具有天然防御机制，其外源DNA可激活TLR9通路，引发细胞因子产生和一氧化氮释放，从而影响细胞状态。此外，细胞状态、核酸纯度、转染试剂选择也均会影响转染效率。
2、转染RAW 264.7细胞是否需要无血清培养基？
不需要。使用Mergene1000® RAW 264.7细胞专用mRNA转染试剂转染后无需除去转染复合物或更换新鲜培养基。实际操作可根据细胞状态，转染后培养4-6 h选择更换新鲜培养基。
3、如何提高转染效率？
可尝试以下方法：
使用高纯度的mRNA；
控制细胞汇合度在70%-90%。
4、细胞贴壁不牢对转染有何影响？
RAW 264.7细胞本身贴壁不牢，转染过程中若不小心，细胞容易脱落，从而影响转染效率。建议避免剧烈吹打或震荡，可适当缩短转染复合物作用时间，以减少应激反应。
5、转染后细胞死亡严重怎么办？
可尝试以下方法降低死亡率：
使用对数生长期、活力良好的细胞进行转染，避免使用传代次数过多或被污染的细胞；
适当降低核酸或转染试剂用量；
转染后培养4-6 h根据细胞状态选择是否更换新鲜培养基。
6、转染后细胞分化严重怎么办？
建议使用RAW 264.7细胞专用培养基；
传代时轻柔操作，弃去贴壁牢固的分化细胞；
根据实际情况缩短转染时间。
从病原体感染到纳米疫苗，从信号通路到基因编辑，RAW 264.7巨噬细胞始终站在先天免疫研究的前沿。掌握其“脾性”，给予合适的mRNA转染策略，便能让这一源于小鼠腹腔里的精灵在培养皿里继续演绎炎症与防御的精妙交响曲。
以上是关于Mergene1000® RAW 264.7细胞转染解决方案的详细介绍。
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