上海心语生物分析神经生长因子的检测方法

 神经生长因子（NGF）是神经营养因子中最早被发现，目前研究最为透彻的，具有神经元营养和促突起生长双重生物学功能的一种神经细胞生长调节因子，它对中枢及周围神经元的发育、分化、生长、再生和功能特性的表达均具有重要的调控作用。

1．PC12细胞的培养：PC12细胞培养于36℃ 7.5％ CO2饱和水汽二氧化碳培养箱中，每2天更换2/3培养液，待细胞接近于汇合时，用含1mmol/L EGTA的上述培养液培养细胞6小时以上或过夜，用RPMI-1640/水（1：1）洗涤细胞3次，吹打分离单个细胞，1：3或1：4分瓶继续培养。PC12细胞的倍增时间约2.5～4天。

2．检测NGF活性：

1）用上述培养液将PC12细胞配成106/ml。每个35mm培养皿中加入0.5ml细胞悬液和系列稀释的NGF待测样品或标准品。对照培养皿中不加NGF。36℃ 7.5％ CO2的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养20～24小时。

2）在相差显微镜下观察PC12细胞。细胞成簇生长，计数100个细胞簇，其中细胞有纤维状突起的细胞簇为阳性细胞簇数。以分化细胞簇数对样品稀释度作图，绘制剂量-反应曲线，计算样品中NGF的含量。

    NGF与受体结合，通过受体介导的内吞机制产生内在化，形成由轴膜包绕、含有NGF、并保持其生物活性的小泡，经轴突沿微管逆行转运至胞体，经酪氨酸蛋白激酶、脂酰肌醇钙、内源性环腺苷酸等第二信使体系的转导，启动一系列级联反应，对靶细胞的某些结构或功能蛋白基因表达进行调控而发挥其生物效应。

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