武汉艾美捷科技有限公司

一、产品概述

由艾美捷代理Bethyl Laboratories推出的本产品为兔源抗人SMC1蛋白第966位丝氨酸磷酸化（pS966）的特异性多克隆抗体（货号：A300-050A）。SMC1（structural maintenance of chromosomes 1）是黏连蛋白（cohesin）复合物的核心亚基之一，与SMC3形成异源二聚体，构成环状结构包裹姐妹染色单体，确保有丝分裂和减数分裂中染色体的正确分离。SMC1 Ser966的磷酸化是DNA损伤应答（DDR）中的关键事件，由ATM/ATR激酶介导，参与同源重组修复及细胞周期检查点调控。本抗体经磷酸化表位特异性亲和纯化，适用于免疫细胞化学/免疫荧光（ICC-IF）、免疫组化（IHC）、免疫沉淀（IP）及免疫印迹（WB）等多种应用，是研究染色体稳定性、DNA损伤修复及细胞周期调控的核心工具。

二、详细规格

参数 | 规格

靶标 | SMC1磷酸化（Ser966）

反应种属 | 人

应用 | ICC-IF, IHC, IP, WB

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

形式 | 全IgG

免疫原 | 围绕人SMC1第966位丝氨酸的磷酸化合成肽（参考序列NP_006297.2）

抗体类型 | IgG

偶联物 | 未偶联

纯度 | 抗原亲和纯化

抗原种属 | 人

浓度 | 1000 ug/ml（1 mg/ml）

储存温度 | 2 - 8 °C

有效期 | 自收货之日起1年

缓冲液 | Tris-柠檬酸-磷酸缓冲液，pH 7–8，含0.09% 叠氮钠

三、产品制备

本抗体采用固相载体固定的磷酸化SMC1（Ser966）特异性表位进行亲和纯化。免疫原为磷酸化合成肽段，对应人SMC1（GeneID 8243，蛋白编号NP_006297.2）第966位丝氨酸周围的氨基酸序列。通过亲和层析富集磷酸化特异性抗体，去除非磷酸化反应及非特异性抗体。免疫球蛋白浓度通过比尔定律测定（1 mg/ml IgG在280 nm处吸光度为1.4）。

四、推荐应用与实验条件

所有Western blot实验建议使用5%脱脂牛奶-TBST作为封闭液和抗体稀释液，一抗孵育条件为4°C过夜。以下为各应用的推荐起始条件：

应用 | 推荐稀释度/用量 | 备注

Western Blot (WB) | 1:2,000 – 1:10,000 | 检测细胞裂解液时，二抗推荐山羊抗兔IgG（H+L）（货号A120-101P）；检测免疫沉淀物时，二抗建议使用抗兔IgG轻链HRP偶联抗体，并在封闭液中加入5%正常猪血清（货号S100-020）以消除重链干扰。

Immunoprecipitation (IP) | 6 ug/mg 裂解物 | 每毫克总蛋白使用6 ul抗体（1 mg/ml浓度对应6 ug）。推荐与Protein A/G磁珠孵育2–4小时或过夜。

Immunohistochemistry (IHC) | 1:1,000 – 1:5,000 | 对福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）组织切片，推荐使用pH 6.0枸橼酸盐缓冲液进行热诱导抗原修复（高压或微波）。

Immunocytochemistry/Immunofluorescence (ICC-IF) | 1:500 – 1:5,000 | 推荐使用4%甲醛固定细胞，然后用0.1–0.5% Triton X-100透化。甲醛固定可保留磷酸化表位，避免使用甲醇（可能破坏抗原）。

DNA损伤诱导建议：为检测SMC1 pS966信号，需对细胞进行DNA损伤处理，常用方案包括：

紫外线（UV）照射：20–50 J/m²，收获前修复1–4小时。

电离辐射（IR）：2–10 Gy，收获前修复1–2小时。

羟基脲（HU）：2 mM，处理16–24小时。

丝裂霉素C（MMC）：0.5 ug/ml，处理24小时。

五、SMC1 pS966的生物学意义

DNA损伤应答标志物：SMC1 Ser966磷酸化是ATM/ATR下游直接事件，其动力学与γH2AX相似，但具有更长的持续信号窗口，适用于检测低剂量辐射或化学损伤。

细胞周期检查点：磷酸化SMC1参与G2/M检查点调控，防止损伤DNA进入有丝分裂。

临床相关性：SMC1A突变导致科妮莉亚·德朗格综合征（Cornelia de Lange syndrome，CdLS2型），表现为多发性发育异常。此外，SMC1A在多种肿瘤中表达异常或突变，影响基因组稳定性。

六、储存与稳定性

储存条件：2 - 8°C，严禁冷冻。冷冻会导致抗体聚集及效价下降。

有效期：自收货之日起1年，在2-8°C未稀释、避光保存。

运输条件：冰袋冷藏运输，收货后请立即存放于2-8°C。

防腐剂：缓冲液含0.09%叠氮钠，可抑制微生物生长。注意：叠氮钠会抑制HRP活性，若用于非HRP检测系统（如荧光）则无影响；若需去除，可通过透析或脱盐柱处理。

七、注意事项

1. 仅限科研使用：不得用于临床诊断或治疗。

2. 磷酸化信号诱导：在常规培养细胞中，SMC1 Ser966磷酸化水平极低。必须对细胞进行DNA损伤处理（如IR、UV、HU或MMC）才能检测到显著信号。未处理细胞可作为阴性对照。

3. 特异性验证：建议使用λ磷酸酶处理细胞裂解物作为对照，确认条带消失；或使用ATM/ATR抑制剂（如KU55933、咖啡因）处理，观察信号减弱。

4. 样品制备：裂解液中必须添加磷酸酶抑制剂（如Na₃VO₄、NaF、β-甘油磷酸）和蛋白酶抑制剂，防止去磷酸化和降解。

5. IHC/ICC-IF注意事项：

甲醛固定可较好保留磷酸化表位，避免使用甲醇固定。

对FFPE切片，热诱导抗原修复（枸橼酸盐pH 6.0）是必需的。

建议同时进行未损伤组织/细胞的阴性对照。

6. 安全操作：叠氮钠有毒，操作时请佩戴手套。废液按有害物处理。