武汉艾美捷科技有限公司

一、产品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的本品为针对人p73蛋白的兔源多克隆抗体（货号：A300-126A），经抗原亲和纯化，适用于免疫沉淀（IP）及Western Blot（WB）检测。p73是p53家族的重要成员，与p53及p63在结构和功能上高度相关，但各自承担独特的生物学角色。p73参与DNA损伤诱导的细胞凋亡应答，并在基因反式激活和生长抑制中发挥关键作用。本抗体特异性识别p73蛋白的N末端区域，可检测除ΔNp73外的多种p73亚型。

二、关键规格参数

参数 | 详细信息

靶标 | p73（TP73）

反应性 | 人

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

免疫原 | 人p73蛋白第1至50位氨基酸之间的区域（实际表位位于1-62）

亚型 | IgG

纯化方式 | 抗原亲和纯化

浓度 | 1000 µg/ml

存储条件 | 2 - 8 °C

保质期 | 收货后1年

缓冲液 | Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液，pH 7-8，含0.09%叠氮化钠

三、免疫原与特异性识别

3.1 表位定位

本抗体识别的表位位于人p73蛋白第1至62位氨基酸残基之间（参考Swiss-Prot条目O15350，GeneID 7161）。该区域对应p73蛋白的N端转录激活域（Transactivation domain, TAD），是p73发挥转录因子功能的核心结构域。

3.2 亚型识别谱

p73基因通过可变剪接产生多种亚型。经验证，本抗体可识别以下全长亚型：

α、β、γ、δ、ε、ζ、κ 亚型

不识别：ΔNp73（N末端截短亚型，缺乏转录激活域）。这一特性使本抗体成为区分全长p73与显性负性抑制亚型ΔNp73的理想工具。

3.3 特异性说明

抗体通过固相载体上固定的p73特异性表位进行亲和纯化，确保高特异性和低背景。免疫球蛋白浓度采用比尔定律测定（1 mg/mL IgG在A280处吸光度为1.4）。

预期交叉反应：基于序列同源性分析，本抗体不与p53或p63发生交叉反应。建议用户在使用时设置相应的阴性对照以验证。

四、应用方法与推荐条件

4.1 Western Blot（WB）

参数 | 条件

稀释比例 | 1:2000 - 1:10,000

封闭/稀释液 | 5% 脱脂牛奶-TBST

一抗孵育 | 过夜孵育

二抗 | 山羊抗兔IgG重链和轻链抗体（货号A120-101P）

操作提示：

阳性对照：推荐使用人细胞系裂解液，如HCT116（p53野生型，p73表达水平中等）、SJSA-1或U2OS。DNA损伤剂（如阿霉素、依托泊苷、顺铂）处理可诱导p73表达上调。

预期条带：全长p73α亚型分子量约为73-75 kDa；其他亚型因剪接差异分子量有所不同（β约68 kDa，γ约55 kDa等）。有时可观察到多条带，代表不同亚型或磷酸化修饰形式。

起始稀释度：建议从1:2000开始，根据信号强度优化至1:5000-1:10000。

样品制备：使用含蛋白酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解细胞。p73为核蛋白，建议进行核质分离或使用超声辅助裂解以提高提取效率。

4.2 免疫沉淀（IP）

参数 | 条件

推荐用量 | 6 µg 抗体 / mg 细胞裂解蛋白

操作提示：

使用非变性裂解缓冲液（如含150 mM NaCl、1% NP-40、50 mM Tris-HCl pH 7.4）以保持蛋白-蛋白相互作用。

每mg总蛋白加入6 µg抗体，4°C旋转孵育2-4小时或过夜。

加入蛋白A/G磁珠或琼脂糖珠，继续孵育1-2小时。

洗涤3-5次后，加入SDS-PAGE上样缓冲液，煮沸变性。

IP产物WB检测的特殊要求：当对免疫沉淀复合物进行WB分析时，必须使用抗兔IgG轻链HRP结合抗体（而非普通抗兔IgG H+L），以避免IP抗体的重链信号（约50 kDa）干扰目标蛋白检测。同时，在封闭液中添加5%正常猪血清（货号S100-020）可进一步降低非特异性背景。

4.3 功能研究应用

由于本抗体识别N端转录激活域，可用于：

检测全长p73与ΔNp73的比例：结合特异性识别ΔNp73的抗体（如C端抗体）进行平行分析。

分析p73的转录激活活性：通过ChIP-qPCR或报告基因实验联合使用。

研究p73与p53的协同作用：在DNA损伤应答中，p73可补偿p53功能缺失。

五、存储与稳定性

存储温度：2 - 8°C，请勿冷冻。高浓度（1000 µg/ml）配方在冷藏条件下极为稳定。若长期不使用，可分装后保存于-20°C或-80°C，但需避免反复冻融。

保质期：收货后1年内保持完整活性。

防腐剂：含0.09%叠氮化钠，可抑制微生物污染。若下游应用涉及HRP检测（如WB中使用HRP二抗），叠氮化钠会抑制过氧化物酶活性，需通过透析或脱盐柱去除。对于IP实验，叠氮化钠通常不影响抗体与蛋白A/G的结合。

缓冲液体系：Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液（pH 7-8），兼容多数免疫检测体系。

本产品适用于p53家族生物学、DNA损伤应答、细胞凋亡机制及肿瘤耐药性等相关研究领域。