武汉艾美捷科技有限公司

在蛋白质翻译后修饰与转录调控研究中，精氨酸甲基化是一类关键调节机制。CARM1（coactivator-associated arginine methyltransferase 1，也称PRMT4）作为Ⅰ型精氨酸甲基转移酶，催化组蛋白和非组蛋白的精氨酸不对称二甲基化，参与转录共激活、RNA剪接及核受体信号通路。针对CARM1的高质量抗体是实现免疫印迹、免疫沉淀及组织化学分析的必备工具。以下提供一款由艾美捷Bethyl Laboratories推出的兔源抗CARM1多克隆抗体（全IgG，抗原亲和纯化）（货号：A300-421A）的完整技术规格、应用条件与操作要点，供科研人员参考。

一、产品核心规格

靶点：CARM1 / PRMT4（人/小鼠反应性）  

宿主/克隆性：兔 / 多克隆  

抗体形式：全IgG，未偶联  

免疫原：人CARM1蛋白第558位至C末端（第585位）之间的特异性表位，具体识别区域位于550–585（参考SwissProt Q86X55，GeneID 10498）  

纯化方式：抗原亲和纯化——将该表位固定于固相载体，从抗血清中特异性捕获目标抗体  

浓度：1000 µg/ml（高浓度配方，以比尔定律测定，1 mg/ml IgG在280 nm处吸光度为1.4）  

缓冲液：Tris-柠檬酸-磷酸缓冲液，pH 7–8，含0.09% 叠氮钠  

储存与效期：2–8°C，自收货起1年内稳定  

该抗体经抗原亲和纯化后，去除了血清中非特异性IgG及其他杂蛋白，显著降低免疫印迹和免疫沉淀中的背景交叉反应。高浓度（1 mg/ml）配方便于灵活稀释，尤其适合需要高灵敏度的实验（如超低稀释比WB）。

二、应用性能与推荐条件

1. 免疫印迹（Western Blot，WB）

稀释范围：1:10,000 – 1:25,000（极宽高稀释比，突出高浓度优势）  

封闭及抗体稀释液：5% 脱脂牛奶-TBST  

一抗孵育：推荐4°C过夜  

二抗注意事项：  

检测细胞裂解液时，可使用山羊抗兔IgG（重链+轻链）二抗（如A120-101P）。  

检测免疫沉淀后的样品时，为避免变性条件下IgG重链（约55 kDa）与CARM1（约66 kDa）信号重叠，建议使用抗兔IgG轻链特异性HRP二抗，同时可在封闭液中添加5%正常猪血清（如Cat. No. S100-020）以进一步抑制非特异性结合。

在1:10,000–1:25,000的稀释范围内，该抗体可清晰识别HEK293、HeLa、小鼠组织等样本中内源性CARM1条带（约66 kDa），背景极低。

2. 免疫沉淀（Immunoprecipitation，IP）

推荐用量：6 µl 抗体 / mg 总蛋白裂解液（注意：由于抗体浓度为1000 µg/ml，6 µl相当于6 µg抗体）  

适用样本：人或小鼠细胞/组织裂解物  

作为亲和纯化的多克隆抗体，该抗体识别CARM1 C末端区域（558–585）的多个表位，免疫沉淀效率高，能有效富集内源性CARM1及其相互作用蛋白（如剪接因子CA150、p160家族共激活因子等）。沉淀后的产物可采用WB验证，配合轻链特异性二抗可避免重链干扰。

3. 免疫组织化学（Immunohistochemistry，IHC）

稀释范围：1:500 – 1:2000  

抗原修复：强烈推荐使用枸橼酸缓冲液（pH 6.0）进行热诱导表位修复  

样本类型：福尔马林固定、石蜡包埋（FFPE）组织切片  

在优化条件下，该抗体可对人及小鼠组织（如睾丸、乳腺、脑组织）中CARM1进行特异性定位分析。CARM1在细胞中主要定位于细胞核，IHC染色应呈现清晰的核信号。

三、储存与操作注意事项

储存：2–8°C，切勿冷冻，反复冻融会导致蛋白活性下降。高浓度抗体（1 mg/ml）在冷藏条件下稳定性极佳。  

防腐剂：叠氮钠（0.09%）可抑制细菌生长，若后续实验涉及细胞培养或需去除叠氮钠，请提前用PBS透析。  

分装建议：由于浓度高，建议无菌分装为小份（如10–20 µl）于2–8°C保存，避免反复取用污染；不可冷冻。  

抗体在Tris-柠檬酸-磷酸缓冲液（pH 7–8）中稳定性良好，效期内浓度及活性保持不变。

四、CARM1靶点背景与研究意义

CARM1（coactivator-associated arginine methyltransferase 1，也称PRMT4）是蛋白质精氨酸甲基转移酶（PRMT）家族的重要成员。其催化组蛋白H3第17位精氨酸（H3R17）和第26位精氨酸（H3R26）的不对称二甲基化，以及多种非组蛋白底物（如p300/CBP、CA150、NF-κB p65、雄激素受体）的甲基化。主要功能包括：

转录共激活：CARM1与p160家族共激活因子（如SRC-1）协同作用，增强核受体（如雄激素受体、雌激素受体）介导的基因转录。  

RNA剪接调控：CARM1甲基化剪接因子CA150，连接转录延伸与剪接过程；CARM1功能异常与脊髓性肌萎缩症（spinal muscular atrophy）发病机制相关。  

免疫与炎症：作为NF-κB通路的共激活因子，CARM1甲基化p65亚基，促进炎症相关基因表达。  

癌症相关性：CARM1在前列腺癌、乳腺癌等多种肿瘤中过表达，参与肿瘤细胞增殖、侵袭及耐药。

因此，高特异性抗CARM1抗体可用于：

精氨酸甲基化相关信号通路研究；

核受体共激活复合物的免疫沉淀-质谱分析；

肿瘤组织芯片中CARM1表达的IHC评估；

剪接调控机制研究（结合CLIP-seq或RIP-seq）。