异柠檬酸裂解酶(ICL)测定试剂盒/微量法/96样

异柠檬酸裂解酶(ICL)测定试剂盒/微量法/96样

测定意义：

ICL（EC4.1.3.1 ）主要存在于植物和微生物中，油料作物种子在萌发过程中，通过乙醛酸循环及其他过程将脂肪转变成碳水化合物。ICL  是乙醛酸循环的关键酶之一。

测定原理：

CL  催化异柠檬酸降解为乙醛酸和琥珀酸，乙醛酸和 NADH  在 LDH   的作用下生成乙醇和 NAD ，NADH  在340nm  下有特征吸收峰，监测 340nm  吸光度的减小速率可间接反应 ICL  活性。

自备仪器和用品：

紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、移液器、微量石英比色皿/96  孔板、研钵、冰和蒸馏水。

测定步骤：

1 、 分光光度计或酶标仪预热 30min   以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。

2 、 样本测定

（1）工作液的配置，将试剂二和试剂三转移至试剂一中，充分混合溶解，置于 37℃（哺乳动物）或 25℃ （其它物种）水浴 5min；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

（2）在试剂四中加入 4mL  蒸馏 水，充分溶解待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
（3）在微量石英比色皿或 96  孔板中加入 10 μ L  样本、150 μ L   工作液和 40 μ L  试剂四，混匀，立即记录 340nm  处 20s   时的吸光值 A1  和 2min20s  后的吸光值 A2，计算 ΔA=A1-A2。

注 意：

正式测定前务必取 2-3  个预期差异较大的样本做预测定。