Cell Meter? Fluorimetric Intracellular Nitric Oxide (NO) Activity Assay Kit *Orange Fluorescence Optimized for Flow Cytometry* 新品

产品介绍

一氧化氮（NO）是一种重要的生物调节因子，参与多种生理和病理过程。一氧化氮生成异常与多种免疫性疾病、心血管疾病、神经退行性疾病及炎症性疾病相关。作为一种自由基，一氧化氮极易被氧化，在体内的浓度相对较低，这使得检测并阐明其在生物系统中的作用颇具挑战性。

Cell Meter 细胞内一氧化氮（NO）活性检测试剂盒为监测活细胞内的一氧化氮水平提供了灵敏的工具。本试剂盒采用 Nitrixyte™探针，该探针是检测和成像细胞内游离一氧化氮的优质试剂，可替代 DAF-2。与DAF-2 探针相比，Nitrixyte™探针具有更好的光稳定性和更强的细胞渗透性。

Cell Meter 细胞内一氧化氮（NO）活性检测试剂盒具体使用 Nitrixyte™ Orange 探针，它能与一氧化氮反应生成明亮的橙色荧光信号，其光谱特性与 Cy3® 和 TRITC 相似。Nitrixyte™ Orange 可轻松进入活细胞，其荧光信号可使用 Cy3® 或 TRITC 的滤光片组方便地监测。该试剂盒经过优化，适用于流式细胞术检测。

样本实验方案

概述

1.准备细胞（0.5-1×106细胞/ mL）

2.将1 µL 500X Nitrixyte 橙色加入0.5 mL细胞悬液中

3.将细胞与测试化合物和Nitrixyte Orange在37°C下孵育

4.用流式细胞仪分析

储备溶液配制

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免反复冻融。

 NONOate阳性对照储备溶液（50 mM）：

向 NONOate 阳性对照（组分 B）的小瓶中加入 200 微升双蒸水（ddH₂O），制成 50 mM 的储备液

 工作溶液

NONOate阳性对照

用检测缓冲液（组分C）将NONOate阳性对照原液稀释至1-2 mM工作溶液。

实验案例示例

1.向0.5 mL细胞悬液中加入1 µL 500X Nitrixyte 橙色（组分A）。

注意：对于贴壁细胞，用0.5 mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整，并在与Nitrixyte Orange孵育之前用含血清的培养基洗涤细胞一次。

2.在 37°C 条件下，让细胞与测试化合物和 Nitrixyte™ Orange 共同孵育一段所需时间，以产生内源性或外源性一氧化氮（NO）

注意：a.合适的孵育时间取决于细胞类型和所用的测试化合物。需为每个实验优化孵育时间

          b.我们的实验中，将 Raw 264.7 细胞与 1 倍浓度的 Nitrixyte™ Orange、20 微克 / 毫升的脂多糖（LPS）以及 1 mM 的 L - 精氨酸（L-Arg）在细胞培养基中于 37°C 共同孵育 16 小时。

3.将预先与 Nitrixyte™ Orange 孵育 30 分钟的细胞离心。用 1 mM 的 DEA NONOate 阳性对照工作液重悬细胞，在 37°C 下再孵育 30 分钟

4.使用流式细胞仪监测FL2通道（Ex / Em = 488/590 nm）处的荧光强度。