BT20/nKR人乳腺癌细胞

                                                BT20/nKR人乳腺癌细胞

 细胞系背景与可能修饰:

基础特性：

原始BT20为三阴性乳腺癌（TNBC）模型，ER-/PR-/HER2-，高侵袭性，常用于耐药性和转移研究。

“nKR”后缀可能提示以下改造（需文献验证）：

荧光报告基因（如mCherry-Katushka-RFP，用于活体成像）；

耐药基因导入（如新霉素-卡那霉素抗性筛选标记）；

CRISPR编辑（如敲除KRAS或相关通路基因）。

细胞特性：

种属来源:人

性别年龄:74 岁，女性

组织来源:乳腺

生长特性:贴壁生长

细胞形态:上皮细胞样

细胞规格:1 X 106cells/T25 或 1 mL 冻存管

培养条件:RPMI1640 with L-Glutamine(300mg/L) + 10% FBS + 25mM HEPES and 25mM NaHCO3,90%

冻存条件:90% FBS + 10% DMSO

传代方法:1:3 传代, 2-3 天传 1 代

2. 研究应用方向:

机制研究：

若nKR涉及KRAS突变，可探索MAPK/ERK通路在TNBC中的调控；

结合单细胞测序解析肿瘤异质性。

治疗开发：

测试KRAS抑制剂（如Sotorasib）或联合免疫疗法（抗PD-1+化疗）；

构建PDX模型评估体内药效。

3. 实验设计与注意事项：

验证需求：

通过测序或WB确认nKR的具体修饰（如KRAS突变或荧光蛋白表达）；

比较原始BT20与nKR的增殖/迁移差异（划痕实验、Transwell）。

培养条件：

基础培养基：EMEM + 10% FBS；

若含抗性基因，需添加相应抗生素（如G418用于新霉素筛选）。

公司出售的产品：

 注意事项：

污染防控：细菌污染：培养液浑浊、变黄，需添加抗生素（如青霉素-链霉素），污染严重时丢弃。

霉菌污染：显微镜下可见丝状/絮状漂浮物，需彻底消毒培养箱（过氧乙酸擦拭+紫外线照射），污染细胞立即丢弃。

支原体污染：无明显外观变化，需定期用PCR或荧光法检测，污染后可用支原体清除试剂处理。

操作规范：收到细胞后，先检查包装完整性及干冰状态，镜检细胞形态并拍照记录（40x、100x、200x）。

未开封细胞若污染或活性差（3天内反馈），可申请重发；客户操作失误导致问题不重发。

运输与保存：干冰运输：冻存管含1×10⁶ cells，收到后立即转入液氮或-80℃冰箱。

常温运输：T25培养瓶，收到后静置3-4小时稳定状态，再换液或传代。