仙鹤草探针法PCR鉴定试剂盒

产品用途

专用于仙鹤草核酸的定性或定量检测，适用于科研用途，不可用于临床诊断。

检测原理

基于TaqMan探针法实时荧光定量PCR技术：

特异性引物与探针：针对仙鹤草基因保守区域设计，探针5'端标记FAM荧光基团，3'端含淬灭基团（如NFQ）。

信号释放：PCR扩增时，Taq酶切割探针，分离荧光基团与淬灭基团，释放荧光信号，通过仪器实时监测定量。

试剂盒组成

| 成分 | 规格/功能说明 |

| qPCR缓冲液 | 500μL（提供反应基础环境） |

| 酶混合液 | 50-100μL（含逆转录酶、Taq酶等） |

| 荧光模板稀释液 | 1mL（用于标准品梯度稀释） |

| 引物-探针干粉/混合液| 50T（特异性扩增仙鹤草靶序列） |

| 阳性对照 | 50μL（10^7-10^8拷贝/μL人工DNA片段） |

| 阴性对照 | 50μL（无核酸酶水） |

操作步骤

1. 标准曲线制备（定量检测需6个梯度稀释）

阳性对照依次10倍稀释（10^1-10^6拷贝/μL），独立操作避免污染。

2. 样本处理

DNA提取：推荐使用商品化提取试剂盒，设置阴性/阳性对照。

保存：短期-20℃，长期-70℃，避免反复冻融。

3. qPCR反应体系（20μL）

| 组分 | 体积 |

| qPCR缓冲液 | 10μL |

| 酶混合液 | 2μL |

| 引物-探针混合液 | 2μL |

| 模板DNA/标准品 | 5μL |

4. 扩增程序

| 步骤 | 温度 | 时间 | 荧光采集 |

| 逆转录（若需） | 50℃ | 10-30min | 否 |

| 预变性 | 95℃ | 10min | 否 |

| 扩增（40循环） | 95℃ | 15sec | 否 |

| | 55-60℃ | 30-60sec | FAM通道 |

结果判读

定量分析：以标准曲线log值为横轴，Ct值为纵轴，计算样本浓度。

定性分析：

阳性：Ct≤35（扩增曲线明显）；

阴性：Ct≥40；

灰区（35<Ct<40）：需复测确认。

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需分区域进行，防止污染。

质量控制：每批次实验需包含阴/阳性对照。

局限性：

基因突变可能导致假阴性；

交叉污染或运输不当可能影响结果准确性。

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