夏枯草探针法PCR鉴定试剂盒

技术原理

基于实时荧光定量PCR（qRT-PCR）探针法：

探针设计：5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团，通过Taq酶5'→3'外切酶活性切割探针，释放荧光信号。

定量分析：通过检测扩增过程中荧光信号强度（Ct值），实现对目标RNA/DNA的定量或定性检测。

高特异性：引物及探针针对夏枯草高度保守序列设计，避免交叉反应。

试剂盒组成

| 成分 | 规格 | 功能 |

| 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500μL | 提供反应体系基础环境 |

| 探针法qRT-PCR酶混合液 | 100μL | 含逆转录酶、Taq酶等 |

| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1 mL | 标准品稀释 |

| 夏枯草引物混合液 | 100μL | 特异性扩增目标序列 |

| 夏枯草qRT-PCR探针 | 50μL | 荧光信号释放 |

| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50μL | 标准曲线制备 |

| 说明书 | 1份 | 操作指南 |

实验步骤

1. 标准曲线制备（6个梯度稀释）

使用阳性对照按10倍梯度稀释（10⁷~10²拷贝/μL），独立操作避免污染。

2. 样本RNA提取

建议设置阴性对照（NC）和阳性对照（PC），使用兼容RNA提取试剂盒纯化。

3. qRT-PCR反应体系（20μL）

| 组分 | 样品管 | 阴性对照 | 标准曲线管 |

| 缓冲液 | 10μL | 10μL | 10μL |

| 酶混合液 | 2μL | 2μL | 2μL |

| 探针 | 1μL | 1μL | 1μL |

| 引物混合液 | 2μL | 2μL | 2μL |

| 模板RNA | 5μL | - | - |

| 超纯水 | - | 5μL | - |

| 标准品 | - | - | 5μL |

4. 反应程序

| 步骤 | 温度 | 时间 |

| 逆转录 | 50℃ | 30 min |

| 预变性 | 94℃ | 10 min |

| 扩增（40循环） | 94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集荧光） |

数据分析

定量检测：以标准曲线log值为横轴，Ct值为纵轴，计算样本浓度。

定性检测：

阳性：Ct ≤ 35，典型扩增曲线；

阴性：Ct ≥ 40；

可疑（35<Ct<40）：需重复检测。

注意事项

防污染：分区操作（样本处理、试剂配制、扩增），使用带滤芯枪头。

储存：-20℃避光保存，避免反复冻融。

质量控制：每次实验需包含阴/阳性对照。

禁用范围：仅限科研，不可用于临床诊断。

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