络石藤探针法PCR鉴定试剂盒

络石藤探针法PCR鉴定试剂盒

商品属性

技术原理

本试剂盒基于实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术，采用探针法检测络石藤特异性核酸序列。探针5'端标记荧光报告基团，3'端标记淬灭基团。PCR扩增时，Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，释放荧光信号，通过实时监测荧光强度实现靶序列的定性与定量分析。

产品组成

| 成分 | 规格/含量 |

| 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500μL |

| qRT-PCR酶混合液 | 100μL |

| 荧光PCR模板稀释液 | 1mL |

| 络石藤引物混合液 | 100μL |

| 络石藤探针 | 50μL |

| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50μL |

| 说明书 | 1份 |

注：需自备样品RNA提取试剂。

操作步骤

1. 标准曲线制备（10倍梯度稀释）

标记离心管（6管），依次稀释阳性对照至10⁶~10¹拷贝/μL，冰上保存备用。

2. 样品RNA制备

建议设置阴性对照（NC）和阳性对照（PC）。

使用兼容的RNA提取方法（如柱式提取法）。

3. qRT-PCR反应体系（20μL）

| 成分 | 样品管/标准曲线管 | 阴性对照 |

| qRT-PCR缓冲液 | 10μL | 10μL |

| 酶混合液 | 2μL | 2μL |

| 探针 | 1μL | 1μL |

| 引物混合液 | 2μL | 2μL |

| 模板（样品/标准品） | 5μL | - |

| 超纯水 | - | 5μL |

4. 反应程序

| 步骤 | 温度 | 时间 |

| 逆转录 | 50℃ | 30 min |

| 预变性 | 94℃ | 10 min |

| 扩增（40循环） | 94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM通道信号） |

数据分析

定量检测：以标准曲线（Ct值-log拷贝数）计算样品浓度。

定性检测：

阳性：Ct≤36，扩增曲线呈S型；

阴性：Ct≥40；

灰区（36<Ct<40）：需复测确认。

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在不同区域进行，避免交叉污染。

质量控制：每次实验需包含阴/阳性对照。

探针保护：避光保存，避免反复冻融。

废弃物处理：实验后使用10%次氯酸或75%乙醇消毒台面及移液器。

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