谷胱甘肽还原酶（GR）检测试剂盒（分光光度法50T/48S）

谷胱甘肽还原酶（glutathione reductase, GR）说明书

                                                  分光光度法 50管/48样

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定                                             

测定意义：

GR是广泛存在于真核和原核生物中的一种黄素蛋白氧化还原酶，是谷胱甘肽氧化还原循环的关键酶之一（通常昆虫中GR被TrxR取代）。GR催化NADPH还原GSSG生成GSH，有助于维持体内GSH/GSSG比值。GR在氧化胁迫反应中对活性氧清除起关键作用，此外GR还参与抗坏血酸－谷胱甘肽循环途径。

测定原理：

GR能催化NADPH还原GSSG再生GSH，同时NADPH脱氢生成NADP+；NADPH在340 nm有特征吸收峰，相反NADP+在该波长无吸收峰；通过测定340 nm吸光度下降速率来测定NADPH脱氢速率，从而计算GR活性。

组成：

试剂二：粉剂×2瓶，-20℃保存。临用前加入3 ml蒸馏水，混匀。

试剂三：粉剂×2支，-20℃保存。临用前加入1.5 ml蒸馏水，混匀。

自备仪器和用品：

紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、移液器、1ml石英比色皿和蒸馏水

粗酶液提取：

1. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml试剂一）进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心15min，取上清，置冰上待测。

2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1ml试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心15min，取上清置于冰上待测。

3. 血清等液体：直接测定。

操作步骤：

1. 分光光度计预热30 min，调节波长到340 nm，蒸馏水调零。

2. 试剂一置于25℃（普通物质）或者37℃（哺乳动物）中预热30min。

3. 测定管：取1ml石英比色皿，依次加入50μl试剂三，100μl试剂二， 750μl试剂一，100μl上清液，混匀，于340nm迅速测定初始吸光度和180 s吸光度，记为A测1和A测2，△A测定管= A测1﹣A测2。(注意加完上清液后迅速混匀测定)

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