人附红细胞体（人嗜血支原体）染料法荧光定量PCR试剂盒

产品概述

本试剂盒采用染料法荧光定量PCR技术，专用于检测人附红细胞体（人嗜血支原体）的DNA。试剂盒包含优化的预混液、引物及配套试剂，具有高灵敏度和特异性，适用于科研领域的定性或定量分析。

产品组成

2×染料法qPCR预混液（含荧光染料，适配No/Low/High Rox机型）

荧光PCR专用模板稀释液

无菌超纯水

人附红细胞体特异性引物干粉（50次反应）

阳性对照（1×10^7 拷贝/μL）

使用手册

实验前准备

自备材料：样品DNA模板、RNase-free离心管/八连排、移液器、离心机、冰盒、qPCR仪。

试剂处理：

预混液及引物干粉需-20℃保存，使用前置于冰上缓慢解冻，避免反复冻融。

引物干粉需短暂离心后加入165 μL超纯水复溶，混匀后分装保存。

反应体系配置（20 μL/反应）

| 成分 | 体积（μL） |

| 2×预混液 | 10 |

| 正向引物（10 μM） | 0.8 |

| 反向引物（10 μM） | 0.8 |

| 模板DNA | 2-5 |

| 超纯水 | 补足至20 |

注意事项：

建议设置3次技术重复及阴性对照（NTC）。

若需定量分析，需用阳性对照梯度稀释绘制标准曲线（Ct-log浓度）。

扩增程序

预变性：95℃ 3分钟

循环阶段（40 cycles）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）

结果判读

定性检测：

阳性：Ct≤35，且扩增曲线呈典型S型。

阴性：Ct≥40。

可疑（35<Ct<40）：需重复检测。

定量检测：通过标准曲线计算模板浓度。

运输与保存

低温运输，-20℃避光保存，有效期12个月。

注意事项

操作全程需避免核酸污染，建议在超净台中进行。

反应体系配置需在冰上完成，减少酶活性损失。

实验数据需符合MIQE准则，确保可重复性。

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