巴西果仁源性成分染料法荧光定量PCR试剂盒

产品概述

本试剂盒采用染料法荧光定量PCR技术，专用于检测巴西果仁（Bertholletia excelsa）源性成分，适用于食品、药品及环境样本的物种特异性鉴定。试剂盒包含预混优化引物探针、阳性对照及反应体系，具有高灵敏度和特异性，可有效区分巴西果仁与其他植物或微生物DNA。

产品组成

PCR预混液：含Taq DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液及荧光染料（如SYBR Green）。

阳性对照：巴西果仁特异性DNA片段（冻干粉或溶液，浓度1×10^8拷贝/μL）。

模板稀释液：用于标准品梯度稀释。

阴性对照：无DNA模板的灭菌水。

操作步骤

标准品稀释（示例：10^2–10^7拷贝/μL梯度）

标记离心管：编号7至2号管，分别对应10^7至10^2拷贝/μL浓度梯度。

稀释液添加：每管加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液。

梯度稀释：

7号管：加入5 μL阳性原液（1×10^8拷贝/μL），震荡混匀，得10^7拷贝/μL。

依次转移5 μL至下一浓度管，重复混匀步骤，直至2号管（10^2拷贝/μL）。

注意：每次稀释需更换枪头，避免交叉污染。

PCR反应体系配制

反应液配制：按以下比例混合（以50 μL体系为例）：

预混液25 μL

引物探针混合液5 μL

模板DNA 10 μL

补足灭菌水至50 μL。

加样：将混合液分装至PCR管，分别加入待测样本、阳性对照及阴性对照。

荧光定量PCR程序

预变性：95℃ 5分钟。

扩增循环（40轮）：

变性：95℃ 15秒

退火/延伸：60℃ 1分钟（采集荧光信号）。

结果判读

标准曲线：以阳性对照Ct值绘制对数浓度曲线，计算样本拷贝数。

特异性验证：仅巴西果仁DNA应显示扩增曲线，阴性对照无信号。

注意事项

保存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。

污染防控：标准品稀释与样本处理需分区操作。

适用性：本试剂盒仅供科研使用，不适用于临床诊断。

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