牛细小病毒染料法荧光定量PCR试剂盒

牛细小病毒染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

预期用途

本试剂盒基于实时荧光PCR技术，通过特异性引物和荧光染料（如TB Green）对牛细小病毒核酸进行定性检测，适用于临床样本、动物组织或粪便中病原体的快速诊断及流行病学监测。

检验原理

采用染料法荧光定量PCR技术，针对病毒保守基因区域设计引物，在扩增过程中荧光染料与双链DNA结合释放信号，通过实时监测荧光强度计算Ct值，判定样本中病毒核酸的存在及载量。

试剂组成

反应预混液：含Taq DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液及荧光染料（如TB Green）。

酶液：优化浓度的热启动酶。

阳性质控品：含BVDV靶序列的重组质粒。

阴性质控品：无核酸酶水。

DEPC水：用于反应体系补足。

注：25T/盒与50T/盒包装规格差异详见实际产品标签。

储存条件及有效期

-20℃避光保存，避免反复冻融（≤5次），有效期12个月。

适用仪器

兼容主流荧光定量PCR仪，包括ABI 7500、Bio-Rad CFX、LightCycler等。

使用方法

样本处理

核酸提取：推荐使用磁珠法或离心柱法提取样本RNA，溶解于20-50μL无核酸酶水。

反应体系配制（20μL/反应）

预混液10μL，上下游引物各1.0μL，模板RNA 1.5μL，DEPC水补至20μL。

PCR扩增程序

预变性：95℃ 1分钟；

扩增：95℃ 15秒→51℃ 30秒，40循环；

熔解曲线分析（可选）：95℃ 15秒→60℃ 1分钟→95℃ 15秒。

结果判定

阳性：Ct值≤35且扩增曲线呈典型S型；

可疑：Ct值35-40，建议重复检测；

阴性：无扩增曲线或Ct值≥40。

注意事项

实验分区操作（试剂准备区、样本处理区、扩增区），避免交叉污染。

阴/阳性质控品需与样本同步检测，质控结果无效时实验需重做。

不同批号试剂组分不可混用。

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