大鼠颈静脉内皮细胞

大鼠颈静脉内皮细胞

产品信息：

产品名称 大鼠颈静脉内皮细胞

组织来源 颈静脉组织
种属 大鼠

产品规格 5×10^5Cells/T25

细胞简介：

细胞详述

颈静脉存在于脊椎动物颈部的静脉。血管内皮细胞层是血液和其它组织的天然屏障。内皮细胞同时会合成和分泌凝血和纤维蛋白溶解系统的增强和抑制物，以及影响血小板粘附和聚集的媒介物。它们同时也会分泌控制细胞增殖的蛋白来维持血管壁的健康。内皮细胞会分泌 t-PA和PAI-1等抗血栓因子以及响应TNF-α，继而分泌细胞因子GM-CSF，表达ICAM-1表面抗体，产生大量的一氧化氮和endothelin。原代静脉内皮细胞的体外培养系统有助于在特定的体外条件下研究血管内皮细胞的功能。

细胞特性

1） 组织来源于实验动物正常的颈静脉组织。

2） 细胞鉴定：血小板-内皮细胞粘附分子（PECAM-1/CD31）或血管假性血友病因子（vWF）免疫荧光染色为阳性。

3） 经鉴定细胞纯度高于90%。

4） 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

5） 细胞生长方式：梭形，多角形细胞，贴壁培养。

推荐培养基：

我们推荐使用 Delf 原代内皮 细胞 培养体系 作为体外培养的培养基。
产品定义：

大鼠颈静脉内皮细胞是覆盖在大鼠颈静脉内壁的单层扁平上皮细胞，构成颈静脉的内膜。它可调节颈静脉的血管张力和通透性，参与静脉血液的回流过程，同时具有抗凝功能，防止血栓形成，在颈静脉炎、颈静脉血栓形成及静脉血管重构研究中具有重要作用。
原代细胞分离：

组织取材

无菌操作是底线：取材前对动物/组织进行严格消毒，全程在超净台内操作，所有工具提前灭菌

新鲜度决定活性：取材后立即放入预冷的含双抗的PBS中，30分钟内完成分离，若无法即时处理，可暂存于4℃冰箱（不超过24小时）

精准取材：避开血管、脂肪、结缔组织等非目标组织，比如分离肝细胞时要剔除胆囊，分离神经细胞时要去除脑膜

组织处理

机械法：通过剪碎、研磨、过滤等方式分散组织，适用于结缔组织较少的组织（如肝脏、肾脏），注意力度适中，避免过度研磨损伤细胞

酶解法：根据组织类型选择合适的酶：

胰蛋白酶：适用于消化上皮组织、肝、肾等，浓度0.25%-0.5%，消化时间15-30分钟，37℃

胶原酶：适用于消化结缔组织、脂肪组织、肌肉组织等，浓度0.1%-0.3%，消化时间1-4小时，37℃，可加入EDTA增强效果

透明质酸酶：常与胶原酶联用，消化软骨、滑膜等富含透明质酸的组织

联合法：机械剪碎后再进行酶解，兼顾效率与细胞活性

细胞筛选与纯化

过滤：使用200-400目细胞筛过滤细胞悬液，去除未消化的组织块

离心：800-1200RPM离心5-8分钟，弃上清后用PBS重洗2-3次，去除细胞碎片和酶液

特异性纯化：使用差速贴壁法（利用不同细胞贴壁速度差异）、密度梯度离心法（如Percoll、Ficoll）、免疫磁珠分选或流式细胞术，获得高纯度目标细胞
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原代细胞实验注意事项：

取材要快、要新鲜、全程无菌

组织离体时间越短越好，冰上操作，减少缺血损伤。

严格控制细胞代数

原代细胞只建议用 P0～P3，代数越高越容易分化、结果越不可靠。

接种密度宁高不低

原代细胞普遍怕稀，太稀不贴壁、不生长、容易凋亡。

消化是关键，宁轻勿重

胰酶 / 胶原酶只消化到细胞变圆就终止，过度消化必死一批。

吹打轻柔，避免机械损伤。

培养基和血清不要随便换批次

血清、基础培养基、添加因子固定厂家固定批次，换批次必须先预实验。

避免频繁折腾细胞

少开培养箱门，不反复观察、不反复拿进拿出，温度、pH 波动对原代杀伤极大。