乙型肝炎病毒X蛋白探针法荧光定量PCR试剂盒

产品概述

本试剂盒基于探针法荧光定量PCR技术开发，用于检测乙型肝炎病毒X蛋白（HBx）的DNA或RNA。具有高灵敏性（检测限低至100拷贝/反应）、高特异性（针对HBx保守区设计，无交叉反应），支持定性和定量分析，线性范围覆盖5个数量级。

试剂盒组成

探针法qPCR缓冲液

qPCR酶混合液（含Taq DNA聚合酶、逆转录酶等）

荧光PCR专用模板稀释液

HBx特异性引物及探针混合液（FAM标记）

阳性对照（1×10⁸拷贝/μL，无传染性DNA片段）

说明书

注：具体组分以实际包装为准。

操作流程

1. 标准曲线制备（定量分析）

稀释步骤：

标记6管（7-2号），每管加45μL稀释液。

依次用阳性对照进行10倍梯度稀释（10⁷-10²拷贝/μL），震荡混匀后冰上保存。

2. 样本处理

核酸提取：推荐使用兼容的核酸纯化试剂盒，设置N+2个样本（含阳性/阴性对照）。

阴性对照：超纯水；阳性对照：稀释液（10⁴拷贝/μL）。

3. qPCR反应体系（20μL）

| 成分 | 样品管（μL） | 阴性对照（μL） | 标准曲线管（μL） |

| qPCR缓冲液 | 10 | 10 | 10 |

| 酶混合液 | 2 | 2 | 2 |

| 探针 | 1 | 1 | 1 |

| 引物混合液 | 2 | 2 | 2 |

| 模板（样本/标准品） | 5 | - | 5（对应稀释度） |

| 超纯水 | - | 5 | - |

反应程序：

逆转录（若为RNA）：50℃ 30 min

预变性：94℃ 10 min

扩增（40循环）：94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM信号）

数据分析

定量检测：以标准曲线（log浓度 vs. Ct值）计算样本拷贝数。

定性检测：

阳性：Ct ≤ 35，且扩增曲线正常；

阴性：Ct ≥ 40；

灰区（35<Ct<40）：需复测，复测Ct<40判为阳性。

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在独立区域进行，避免污染。

试剂保存：-20℃避光保存，避免反复冻融（≤7次）。

质量控制：

阴性对照Ct≥40，阳性对照Ct≤30且扩增曲线典型。

无效数据判定：Tm值与阳性对照不符视为假阳性。

存储与有效期

运输：低温（-20℃）避光。

保存：-20℃±5℃，有效期12个月。

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