人GAPDH基因探针法荧光定量PCR试剂盒

预期用途

本试剂盒基于TaqMan探针法荧光定量PCR技术，专用于检测人GAPDH基因的核酸。GAPDH作为糖酵解关键酶，广泛表达于各类组织，是内参基因的常用选择。

产品特点

高灵敏度与特异性：针对人GAPDH基因保守区域设计的引物及探针，避免交叉反应。

即开即用：仅需提供DNA模板，操作便捷。

质控完善：含阳性质控品（明确Ct值范围）和阴性质控品，辅助结果判读。

闭管操作：降低气溶胶污染风险。

适用范围：仅限科研用途，不可用于临床诊断。

检验原理

通过TaqMan探针与目标DNA结合，在扩增过程中释放荧光信号，实时监测荧光强度变化，实现定量分析（绝对定量或相对定量）。

试剂组成

| 组分 | 规格 |

| GAPDH基因扩增液 | 25μL×1管 |

| GAPDH基因反应液 | 975μL×1管 |

| 阳性质控品 | 50μL×1管 |

| 阴性质控品 | 50μL×1管 |

| 说明书 | 1份 |

储存与运输

储存条件：-20℃±5℃避光保存，避免反复冻融（≤7次）。

有效期：12个月。

运输：冰袋（2~8℃）密封运输。

适用仪器

兼容主流荧光定量PCR仪（如ABI系列、Bio-Rad CFX、Roche LightCycler等）。

自备耗材

无核酸酶离心管（0.2mL PCR管、1.5mL离心管）、滤芯吸头（10/200/1000μL）。

离心机、涡旋振荡器、移液器。

样本要求

样本类型：组织、细胞、血液等（需提取DNA）。

保存条件：短期-20℃，长期-70℃（避免反复冻融）。

运输：2~8℃冰袋运送。

操作步骤

DNA提取：推荐使用柱式法提取试剂盒，提取后-15℃暂存。

反应体系配制（20μL/反应）：

反应液：19.5μL

扩增液：0.5μL

模板DNA：5μL

PCR扩增程序（以ABI仪器为例）：

预变性：95℃ 3min

循环：95℃ 15s → 60℃ 30s（40循环，采集FAM通道信号）

结果分析

阳性判定：Ct值≤35且扩增曲线呈S型。

阴性判定：无Ct值或Ct值>38。

注意事项

分区操作（试剂配制区、样本处理区、扩增区），避免污染。

不同批号试剂不可混用。

探针避光保存，避免反复冻融。

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