胞内劳森菌探针法荧光定量PCR试剂盒

产品概述

本试剂盒基于探针法荧光定量PCR（qPCR）技术，专用于检测胞内劳森菌（Lawsonia intracellularis）的核酸。该菌为革兰氏阴性胞内寄生菌，可引发猪增生性回肠炎，对畜牧业危害显著。本产品具备高灵敏度和特异性，适用于科研领域的定性或定量分析。

产品特点

高灵敏度：检测限低至100拷贝/反应，可有效避免假阴性。

特异性强：引物及探针针对胞内劳森菌保守序列设计，无交叉反应。

双重检测模式：支持绝对定量（线性范围≥5个数量级）和定性分析。

即开即用：用户仅需提供DNA模板，操作便捷。

安全对照：提供无传染性DNA片段作为阳性对照（10^7拷贝/μL）。

包装规格

| 成分 | 规格 |

| qPCR缓冲液 | 500 μL |

| qPCR酶混合液 | 50 μL |

| 荧光PCR模板稀释液 | 1 mL |

| 引物-探针干粉 | 50次反应 |

| 阳性对照（10^7拷贝/μL） | 50 μL |

操作流程

标准曲线制备（定量分析）

稀释阳性对照：

使用带芯枪头，按10倍梯度稀释阳性对照（10^1–10^6拷贝/μL），独立操作避免污染。

标记离心管（6–1号），依次加入45 μL稀释液及5 μL上一步稀释产物，涡旋混匀。

样本DNA制备

建议设置阴性对照（NC）和阳性对照（PC）。PC为阳性对照1000倍稀释液。

兼容市售DNA提取试剂盒，需避免交叉污染。

qPCR反应（20 μL体系）

反应体系：

定量分析：N+9个反应管（含6个标准曲线点）。

定性分析：仅需1个标准曲线点（建议10^4拷贝/μL）。

PCR程序：

| 步骤 | 温度 | 时间 |

| 逆转录 | 50℃ | 10 min |

| 预变性 | 95℃ | 10 min |

| 扩增循环 | 95℃ | 15 sec |

| （40循环） | 60℃ | 60 sec（采集FAM信号） |

数据分析

定量：以Ct值对标准曲线计算样本浓度。

定性：Ct≤39为阳性，≥40为阴性；39–40间需复测。

样本保存与运输

短期保存：-20℃；长期保存：-70℃（≤6个月）。

运输条件：2–8℃冰袋，避免反复冻融。

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、加样需在不同区域进行。

防污染措施：使用一次性耗材，实验后以10%次氯酸或75%乙醇消毒台面。

试剂保存：避光保存反应液，使用前充分混匀并离心。

局限性：

结果受样本质量、提取效率及运输条件影响。

基因突变可能导致假阴性；交叉污染可致假阳性。

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