解淀粉芽孢杆菌探针法qPCR试剂盒

产品概述

本试剂盒基于探针法荧光定量PCR（qPCR）技术，专用于解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）的定性和定量检测。试剂盒包含优化的引物、探针及预混反应体系，具有高灵敏性（检测限低至100拷贝/反应）和特异性，适用于科研用途。

产品组成

2×Probe qPCR MasterMix：0.5 mL（含DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液等）

荧光PCR专用模板稀释液：1 mL

解淀粉芽孢杆菌qPCR引物-探针混合液：干粉或预混液（需复溶后使用）

阳性对照（1×10^7~10^8拷贝/μL）：50 μL

超纯水：1 mL（阴性对照用）

使用手册：1份

保存条件

-20℃避光保存，有效期1~2年（不同批次可能差异）。引物-探针干粉需复溶后分装保存，避免反复冻融。

实验操作流程

标准曲线样品制备

稀释阳性对照：

标记6管（1~6号），每管加45 μL稀释液。

依次梯度稀释阳性对照（10倍稀释），获得1×10^1~10^6拷贝/μL的标准曲线样品，冰上暂存。

关键提示：使用带滤芯枪头，独立操作区避免污染。

样品DNA提取

样本设置：

待测样品数（N）+2（阳性/阴性对照）。

阳性对照（PC）：10 μL阳性对照稀释液（如10^4拷贝/μL）加水至所需体积。

阴性对照（NC）：超纯水。

提取方法：兼容市售DNA提取试剂盒，推荐柱式法或免提取核酸释放剂。

qPCR反应体系（20 μL/管）

| 成分 | 样品管（N+2） | 阴性对照 | 标准曲线管（1~6） |

| 2×Probe MasterMix | 10 μL | 10 μL | 各10 μL |

| 引物-探针混合液 | 3 μL | 3 μL | 各3 μL |

| 待测DNA模板 | 7 μL | — | — |

| 超纯水 | — | 7 μL | — |

| 标准曲线稀释液 | — | — | 各7 μL |

反应程序：

预变性：95℃ 5~10 min

40循环：95℃ 15 sec → 60℃ 60 sec（采集FAM通道信号，淬灭基团为TAMRA）

数据分析

定量检测：以标准曲线（log拷贝数 vs. Ct值）计算样品浓度。

定性检测：

阴性对照：Ct≥35或无扩增。

阳性对照：Ct<35且呈典型扩增曲线。

待测样品：Ct<35判为阳性；Ct≥35或无扩增判为阴性；30<Ct<35需复测。

注意事项

防污染：分区操作（样品制备区、PCR反应区），使用滤芯枪头。

质量控制：每次实验需包含阴/阳性对照，无效实验需重复。

适用范围：仅限科研，禁止临床或诊断用途。

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