紫草探针法PCR鉴定试剂盒

技术原理

基于实时荧光定量PCR（qPCR）技术，采用探针法检测原理：

探针设计：5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团，探针与靶序列结合后，Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，释放荧光信号。

定量分析：通过监测荧光信号增长（Ct值）实现靶序列的定量与定性检测。

产品特点

高灵敏度：可检测低至几百拷贝的靶序列。

高特异性：引物及探针针对紫草保守序列设计，避免交叉反应。

即开即用：预混缓冲液、酶、引物及探针，仅需提供样品RNA/DNA模板。

内控设计：含阳性对照（1×10^8拷贝/μL）和阴性对照，排除假阴性干扰。

适用范围：科研用途（不可用于临床诊断）。

试剂盒组成

| 成分 | 规格 | 功能 |

| 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500μL | 提供反应体系基础环境 |

| 酶混合液 | 100μL | 含逆转录酶、Taq酶等 |

| 紫草特异性引物混合液 | 100μL | 靶序列扩增 |

| 荧光探针 | 50μL | 特异性结合并释放信号 |

| 阳性对照 | 50μL（1×10^8拷贝/μL） | 标准曲线制备 |

| 模板稀释液 | 1 mL | 标准品梯度稀释 |

操作步骤

1. 标准曲线制备

将阳性对照按10倍梯度稀释（10^2~10^7拷贝/μL），用于定量分析。

2. 样品处理

提取样品RNA/DNA，建议设置阴性对照（NC）和阳性对照（PC）。

3. PCR反应体系（20μL）

| 组分 | 体积（μL） |

| 缓冲液 | 10 |

| 酶混合液 | 2 |

| 引物混合液 | 2 |

| 探针 | 1 |

| 模板 | 5 |

4. 反应程序

逆转录：50℃ 30 min

预变性：94℃ 10 min

扩增（40循环）：94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM通道信号）

数据分析

定量检测：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样品浓度。

定性检测：

阳性：Ct ≤ 35，扩增曲线呈指数增长。

阴性：Ct ≥ 40。

可疑（35<Ct<40）：需复测确认。

注意事项

操作分区进行，避免气溶胶污染。

使用带滤芯枪头，防止交叉污染。

试剂解冻后需充分混匀，避免反复冻融。

本产品仅限科研使用，临床诊断需合规试剂。

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