竹茹探针法PCR鉴定试剂盒

产品基本信息

规格：50次/盒（20μL反应体系）

保存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融，有效期12个月。

运输条件：低温避光运输。

适用范围：科研用途（不可用于临床诊断）。

检测原理

基于探针法荧光定量PCR技术：

探针设计：5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团，探针结合靶序列后被Taq酶切割，释放荧光信号。

实时检测：通过监测PCR扩增过程中荧光强度的增长，实现对目标DNA/RNA的定量分析（Ct值）。

高特异性：引物及探针针对竹茹（Caulis bambusae in taenia）高度保守区域设计，避免交叉反应。

试剂盒组成

| 成分 | 规格/含量 |

| 探针法qPCR缓冲液 | 500μL |

| qPCR酶混合液 | 100μL（含逆转录酶）|

| 荧光PCR模板稀释液 | 1 mL |

| 竹茹特异性引物混合液| 100μL |

| 竹茹qPCR探针 | 50μL |

| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL）| 50μL |

| 说明书 | 1份 |

实验步骤

标准曲线制备（10²~10⁷拷贝/μL梯度稀释）

取6支离心管，编号2~7，每管加入45μL模板稀释液。

从阳性对照（10⁸拷贝/μL）开始，依次10倍稀释至10⁷~10²拷贝/μL，冰上保存。

样本DNA/RNA提取

推荐使用柱式提取法或兼容的RNA/DNA提取试剂盒。

设置阴性对照（NC，超纯水）和阳性对照（PC，稀释后的阳性标准品）。

qPCR反应体系（20μL）

| 成分 | 样品管（μL） | 阴性对照（μL） | 标准曲线管（μL） |

| qPCR缓冲液 | 10 | 10 | 10 |

| 酶混合液 | 2 | 2 | 2 |

| 探针 | 1 | 1 | 1 |

| 引物混合液 | 2 | 2 | 2 |

| 样本模板 | 5 | - | - |

| 标准曲线稀释液 | - | - | 5（对应梯度） |

| 超纯水 | - | 5 | - |

PCR程序设置

| 步骤 | 温度 | 时间 |

| 逆转录（若需） | 50℃ | 30 min |

| 预变性 | 94℃ | 10 min |

| 扩增（40循环） | 94℃ | 15 sec |

| | 60℃ | 1 min（采集荧光） |

数据分析

定量分析：以标准品log拷贝数为横轴、Ct值为纵轴绘制标准曲线，计算样本浓度。

定性判定：阴性对照Ct≥40；阳性对照Ct≤30，样本Ct≤35判为阳性。

注意事项

操作分区进行，避免气溶胶污染。

探针避光保存，反复冻融≤3次。

实验废弃物需按生物安全规范处理。

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