猪苓探针法PCR鉴定试剂盒

预期用途

本试剂盒基于TaqMan探针法实时荧光PCR技术，用于特异性检测猪苓（Polyporus umbellatus）的核酸序列，适用于科研领域对猪苓的分子鉴定及遗传分析。检测结果仅供研究参考，不可用于临床诊断或治疗。

检验原理

通过设计猪苓基因保守区域的特异性引物及探针，在PCR扩增过程中，探针与目标序列结合后释放荧光信号，利用荧光定量PCR仪实时监测信号强度，实现定性及定量分析。

试剂组成

| 组分 | 规格 |

| 猪苓扩增液 | 25μL×1管 |

| 猪苓反应液 | 975μL×1管 |

| 阳性质控品（人工DNA）| 50μL×1管 |

| 阴性质控品 | 50μL×1管 |

| 说明书 | 1份 |

注意：不同批号组分不可混用，试剂总量满足50次检测需求。

储存与运输

储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融（≤7次）。

有效期：12个月。

运输：低温避光（冰袋或干冰）。

适用仪器

支持ABI、Bio-Rad、LightCycler、MX3000P/3005P等主流荧光定量PCR仪。

需自备：无核酸酶离心管、滤芯吸头（10/200/1000μL）、移液器、离心机等。

样本要求

样本类型：组织（如菌核）、培养物或环境样本。

保存：短期-20℃；长期-70℃（≤6个月）；运输需2~8℃冰袋。

处理：避免交叉污染，推荐使用商品化DNA提取试剂盒（如病毒基因组DNA提取试剂盒）。

操作步骤

1. DNA提取

按实验室标准方法或配套试剂盒提取样本DNA，提取后若未立即检测，需-15℃以下保存。

2. PCR反应体系配制（20μL/反应）

| 试剂 | 用量（N次检测） |

| 猪苓反应液 | 19.5μL |

| 猪苓扩增液 | 0.5μL |

混匀后分装至PCR管，加入5μL模板DNA/对照品。

3. PCR扩增程序

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |

| 预变性 | 95℃ | 3 min | 1 |

| 变性 | 95℃ | 15 sec | 40 |

| 退火/延伸 | 55℃ | 30 sec | |

4.结果分析

荧光通道：FAM（检测通道），无淬灭通道。

阈值设定：Ct值≤35判为阳性。

注意事项

实验需分区操作（试剂配制区、样本处理区、扩增区），避免污染。

阳性质控品含人工合成DNA片段，不可直接接触活体样本。

若扩增曲线异常，需调整Baseline（Start 3~15, Stop 5~20）或阈值线。

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