猪伪狂犬病毒野毒株（gE基因）探针法荧光定量PCR试剂盒

猪伪狂犬病毒野毒株（gE基因）探针法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

预期用途

用于定性或定量检测猪伪狂犬病毒野毒株（gE基因），区分疫苗株与野毒感染，适用于科研及疫情监测。

检测原理

基于TaqMan探针法，靶向gE基因保守区域设计特异性引物及探针，通过荧光信号实时扩增分析。

试剂盒组成

| 成分 | 规格/数量 | 说明 |

| qPCR预混缓冲液 | 500 μL | 含dNTPs、Mg²⁺等反应组分 |

| 热启动Taq酶混合液 | 50 μL | 含探针法专用酶 |

| 荧光模板稀释液 | 1 mL | 用于标准品梯度稀释 |

| 引物-探针干粉 | 50次反应（20 μL体系） | 含gE基因特异性引物及FAM标记探针 |

| 阳性对照（非传染性）| 50 μL（10⁷拷贝/μL） | 质粒DNA或合成片段 |

| 阴性对照 | 40 μL | 灭菌纯水 |

操作步骤

标准曲线制备（定量检测需6个梯度稀释，10¹~10⁶拷贝/μL）：

使用专用稀释液按10倍梯度稀释阳性对照，避免交叉污染。

样本DNA提取：

建议设置制备对照（PC/NC），推荐兼容市售DNA提取试剂盒。

qPCR反应体系（20 μL）：

预混液15 μL + 模板DNA 5 μL，每个样本设3复孔。

扩增程序：

| 步骤 | 温度 | 时间 | 信号采集（FAM通道） |

| 逆转录 | 50℃ | 10 min | 否 |

| 预变性 | 95℃ | 10 min | 否 |

| 扩增循环（40×） | 95℃ 15 sec → 60℃ 60 sec | 是 |

结果判读

定量分析：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样本拷贝数。

定性分析：

阴性：Ct≥40或无扩增曲线；

阳性：Ct≤39且曲线呈典型S型；

灰区（39<Ct<40）：需复测确认。

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在不同区域进行。

防污染措施：使用带滤芯枪头，实验后以10%次氯酸或75%乙醇消毒台面。

储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融（有效期12个月）。

适用范围：仅限科研，不可用于临床诊断。

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