灸甘草探针法PCR鉴定试剂盒

产品概述

本试剂盒采用TaqMan 探针荧光定量 PCR 技术，针对灸甘草（Radix Glycyrrhizae Preparata）特异性基因片段设计引物与探针，可对药材、饮片、配方颗粒、中成药等样品中的灸甘草核酸进行快速、特异、灵敏的定性与定量鉴定，为中药材真伪鉴别、掺伪排查、质量控制与科研检测提供标准化分子生物学解决方案，仅用于科研用途。

产品组成

| 成分 | 规格/含量 | 功能说明 |

| qRT-PCR缓冲液 | 500μL | 提供反应缓冲环境 |

| qRT-PCR酶混合液 | 50μL | 含Taq DNA聚合酶及逆转录酶 |

| 荧光PCR模板稀释液 | 1mL | 标准品及样品稀释 |

| 引物-探针干粉 | 50T（50次反应） | 特异性扩增灸甘草靶序列 |

| 阳性对照（无传染性）| 50μL（10^7拷贝/μL） | 标准曲线制备及质控 |

技术参数

灵敏度：可检测低至10^3拷贝/μL的靶序列。

特异性：引物经生物信息学优化，不与近缘物种DNA交叉反应。

线性范围：定量检测时覆盖5个数量级（10^1~10^6拷贝/μL）。

检测类型：支持定性与定量分析（需配套荧光定量PCR仪）。

操作流程

1. 标准曲线制备

将阳性对照按10倍梯度稀释（10^6~10^1拷贝/μL），每个梯度独立操作以避免污染。

稀释液：使用试剂盒提供的荧光PCR专用模板稀释液。

2. 样本DNA提取

兼容多数商业DNA提取试剂盒，建议设置阴性/阳性对照（N+2设计）。

3. qPCR反应体系（20μL）

程序设置：

逆转录：50℃ 10分钟（若含RNA步骤）；

预变性：95℃ 10分钟；

扩增循环（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 60秒（采集FAM通道信号）。

4. 数据分析

定量检测：以标准曲线log值为横轴，Ct值为纵轴计算样本浓度。

定性判定：

阳性：Ct≤38，明显扩增曲线；

可疑：38<Ct<40，需复测确认；

阴性：Ct≥40或无扩增。

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在不同区域进行，防止交叉污染。

质控要求：

阴性对照：Ct≥40；

阳性对照：Ct≤35且扩增曲线典型。

局限性：

结果受样本质量、提取方法、运输条件影响；

基因突变可能导致假阴性。

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