薏苡仁探针法PCR鉴定试剂盒

技术原理

基于实时荧光定量PCR（qPCR）探针法：

探针设计：5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团，通过Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，释放荧光信号。

定量分析：荧光强度与扩增产物量成正比，通过标准曲线计算起始模板浓度。

高特异性：引物及探针针对薏苡仁保守序列设计，避免交叉反应。

试剂盒组成

| 成分 | 规格/包装 |

| 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500μL |

| qRT-PCR酶混合液 | 100μL |

| 荧光PCR模板稀释液 | 1mL |

| 薏苡仁引物混合液 | 100μL |

| 薏苡仁探针 | 50μL |

| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50μL |

| 说明书 | 1份 |

实验步骤

1. 标准曲线制备（6个10倍梯度稀释，10⁷~10²拷贝/μL）：

使用专用稀释液逐步稀释阳性对照，避免交叉污染。

2. 样品RNA提取：

推荐使用柱式RNA提取试剂盒，设置阳性（PC）和阴性对照（NC）。

3. qRT-PCR反应体系（20μL）：

| 成分 | 体积（μL） |

| qRT-PCR缓冲液 | 10 |

| 酶混合液 | 2 |

| 探针 | 1 |

| 引物混合液 | 2 |

| 模板RNA/DNA | 5 |

4. 反应程序：

逆转录：50℃ 30分钟

预变性：94℃ 10分钟

扩增（40循环）：94℃ 15秒 → 60℃ 1分钟（采集FAM信号）

数据分析

定量检测：以Ct值对标准曲线log浓度作图，计算样本浓度。

定性检测：

阳性：Ct ≤ 35，典型扩增曲线；

阴性：Ct ≥ 40；

可疑结果（35<Ct<40）需复测。

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在不同区域进行。

防污染：使用带滤芯枪头，定期清洁台面（10%次氯酸或75%乙醇）。

保存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。

质量控制：每次实验需包含阴/阳性对照。

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