γ谷氨酰转肽酶(γGT)测试盒

商品属性

测定意义与原理

测定意义

γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT，EC2.3.2.2)是γ-谷氨酰循环中的关键酶，主要功能包括：氨基酸代谢：催化γ-谷氨酰基的转移，参与氨基酸的吸收、分泌和合成谷胱甘肽代谢：是GSH降解的关键酶，在细胞外谷胱甘肽代谢中起重要作用临床诊断：血清γ-GT活性升高常见于肝胆疾病、胰腺疾病、酒精性肝病等药物研究：作为药物代谢酶，参与多种药物的代谢过程，影响药物疗效

测定原理

采用L-γ-谷氨酰-3-羧基-4-硝基苯胺作为底物，γ-GT催化底物水解生成黄色产物2-硝基-5-氨基苯甲酸，在405nm处有特征吸收峰，吸光度变化速率与γ-GT活性成正比。反应式如下： L-γ-谷氨酰-3-羧基-4-硝基苯胺→γ-GT2-硝基-5-氨基苯甲酸+谷氨酸L-γ-谷氨酰-3-羧基-4-硝基苯胺γ-GT2-硝基-5-氨基苯甲酸+谷氨酸

试剂盒组成

组分 规格 作用说明

R1试剂 5×100mL/6×70mL/2×100mL 含三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH8.0)和双甘肽，用于反应体系构建

R2试剂 5×20mL/6×14mL/2×20mL 含L-γ-谷氨酰-3-羧基-4-硝基苯胺，反应底物

γ-GT标准品 1×1000U 用于校准仪器，建立标准曲线

样本稀释液 100mL×1瓶 含三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH8.0)，用于样本稀释

自备仪器与试剂

必备仪器

紫外/可见分光光度计/全自动生化分析仪（405nm检测通道）

台式高速离心机（≥3000g）

恒温水浴锅（控温精度±0.5℃）

可调式移液器（0.5-10μL、10-100μL、100-1000μL）

必备耗材

1mL石英比色皿/96孔板

离心管（1.5mL、10mL）

一次性无菌吸头

手术剪/镊子（用于组织样本处理）

自备试剂

蒸馏水/去离子水

生理盐水（0.85% NaCl）

抗凝剂（肝素/EDTA，仅用于血浆样本）

样本前处理方法

血清/血浆样本血清样本：血液凝固后3000g 4℃离心10min，取血清上清血浆样本：加入抗凝剂（肝素/EDTA）后3000g 4℃离心10min，取上清样本可直接检测，无需提取处理；活性过高时可用样本稀释液稀释

动植物组织样本取新鲜组织，用生理盐水冲洗干净，滤纸吸干水分称取0.1g组织，加入1mL生理盐水进行冰浴匀浆3000g 4℃离心10min，取上清液置冰上待测若酶活性过高，可用生理盐水稀释1-5倍后测定

细胞/细菌样本收集对数生长期细胞/细菌，8000g 4℃离心5min弃上清加入1mL生理盐水重悬，冰浴超声破碎（功率20%，超声3s/间隔10s，重复30次）3000g 4℃离心10min，取上清液置冰上待测

测定操作步骤

全自动生化分析仪操作试剂准备：

R1：直接使用，无需稀释

R2：直接使用，无需稀释

标准品：用样本稀释液稀释成不同浓度（0、100、200、400、600U/L）参数设置：

波长：405nm（主）/546nm（副）

温度：37℃

试剂比例：R1:R2:样本 = 250:50:10

反应类型：速率法，监测时间10-30s测定：

按照仪器操作流程进行样本测定

自动计算γ-GT活性

手动测定操作预温育：

分光光度计预热30min，调节波长到405nm，用蒸馏水调零

R1、R2在37℃水浴中预热10min以上反应启动：

取比色皿，依次加入：R1试剂2.5mL + 样本0.1mL + R2试剂0.5mL

混匀，记录405nm波长下0min（A1）和1min（A2）时的吸光度值

计算ΔA：ΔA = A2 - A1酶活性计算：

根据ΔA值，按照公式计算γ-GT活性

酶活力计算方法

单位定义

U/L：每升样本每分钟催化1μmol底物反应的酶量

U/g鲜重：每克组织鲜重每分钟催化1μmol底物反应的酶量

U/mgprot：每毫克蛋白每分钟催化1μmol底物反应的酶量

计算公式

γ-GT活性(U/L)=ΔA×V反总×106ε×d×V样×Tγ-GT活性(U/L)=ε×d×V样×TΔA×V反总×106

ΔA：1min内吸光度变化值

V反总：反应体系总体积（3.1mL）

ε：2-硝基-5-氨基苯甲酸摩尔消光系数（9.9×10³ L/(mol·cm)）

d：比色皿光径（1cm）

V样：测定时加入样本体积（0.1mL）

T：反应时间（1min）

简化公式

γ-GT活性(U/L)=313×ΔAγ-GT活性(U/L)=313×ΔA

性能指标

指标 要求

线性范围 0~500U/L，线性相关系数r≥0.9900

分析灵敏度 AU/L/min≥2×10⁻⁴

准确度 相对偏差≤10%

重复性 CV≤5%

批间差 R≤10%

稳定性 2-8℃保存12个月，活性保留≥90%

注意事项

样本处理：

血清样本应避免溶血，溶血会导致γ-GT活性升高

样本需新鲜制备，2-8℃可保存1天；-20℃可保存1个月

避免反复冻融样本，以免影响酶活性

试剂使用：

R2试剂对光敏感，应避光保存，避免长时间暴露于光下

不同批号的试剂不要混用，需重新绘制标准曲线

试剂使用前应恢复至室温，避免温度差异影响结果

测定过程：

加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应体系温育时间相同

实验完成后应立即读取吸光度值，避免吸光度漂移

使用一次性吸头以免交叉污染，吸取底物时避免使用带金属部分的加样器

质量控制：

每次实验需设置空白对照、标准曲线和质控样本

定期校准仪器，确保检测结果准确性

若结果偏差较大，需检查试剂是否变质或样本处理是否正确

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