人膀胱成纤维细胞
产品信息:
产品名称 人膀胱成纤维细胞
组织来源 膀胱组织
种属 人
产品规格 5×10^5Cells/T25
英文名称 | Human Bladder Fibroblast cells | 规格 | 5×105 |
细胞形态 | 成纤维细胞样 | 货号 | P-X1336 |
培养信息:
方法简介:实验室分离的人膀胱成纤维细胞采用胰蛋白酶 - 胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来,细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。
质量检测:实验室分离的人膀胱成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
产品名称:人膀胱成纤维细胞
组织来源:膀胱组织
产品规格:5×10⁵Cells/T25培养瓶
培养信息:包被条件
培养基含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率:每2-3天换液一次
生长特性:贴壁
细胞形态:成纤维细胞样
传代特性:可传5代左右;3代以内状态最佳
消化液:0.25%胰蛋白酶人膀胱成纤维细胞体外培养周期有限;建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养,以此保证该细胞的最佳培养状态。
细胞简介 :
人膀胱成纤维细胞分离自膀胱组织;膀胱是一个储尿器官,在哺乳类动物,它是由平滑肌组成的一个囊形结构,位于骨盆内,其后端开口与尿道相通。膀胱与尿道的交界处有括约肌,可以控制尿液的排出。膀胱壁由三层组织组成,由内向外为黏膜层、肌层和外膜。肌层由平滑肌纤维构成,称为逼尿肌,逼尿肌收缩,可使膀胱内压升高,压迫尿液由尿道排出。在膀胱与尿道交界处有较厚的环形肌,形成尿道内括约肌。在括约肌收缩能关闭尿道内口,防止尿液自膀胱漏出。膀胱壁分为三层:即浆膜层(蜂窝脂肪组织)、肌肉层(逼尿肌、膀胱三角区肌)和黏膜层(极薄的一层移行上皮组织)。成纤维细胞(Fibroblast)是疏松结缔组织的主要细胞成分,由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大,轮廓清楚,多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构,其细胞核呈规则的卵圆形,核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛,细胞质嗜弱碱性,具明显的蛋白质合成和分泌活动,在一定条件下,它可以实现跟纤维细胞的互相转化;成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的膀胱成纤维细胞呈圆形、折光性良好,悬浮于培养基中。30min细胞贴壁,其中部分开始伸出伪足,表现为小的突起;6h后细胞基本贴壁完全,伸展成梭形,胞核清晰,分布较均匀,散在生长,不聚集成团;细胞生长迅速,5-7天即呈融合状态,细胞排列紧密,有的交叉重叠生长,平坦、胞体较大,细胞质透明,细胞核较大,呈椭圆形,颜色淡。细胞融合,并彼此连接成网状;细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。膀胱成纤维细胞分泌的生长因子是一种具有多功能的促有丝分裂原,研究已表明其参与恶性肿瘤的形成过程。近年来,碱性成纤维细胞生长因子在膀胱癌发病过程中的作用、与生物学行为之间的关系以及治疗上的应用已受到重视。
细胞培养方法:
1、细胞传代:细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%胰酶(T25瓶),使胰酶覆盖整个瓶或皿,盖好放入培养箱消化;
③1-2min后,显微镜下观察细胞,若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化;若细胞还是贴壁,放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止;
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清;
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中,T25培养瓶加6-8ml培养基;
⑥悬浮细胞直接离心收集,细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏:
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化,时间1min左右,加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1-2ml培养基吹匀,将细胞悬液加入培养瓶中,补加适量培养基。
3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次,加入1mL 0.25%胰蛋白酶(T25瓶)
②1-2min后,显微镜下观察细胞,大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化;
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1ml冻存液重悬细胞;
④将冻存管放入程序降温盒,放入-80℃冰箱,4小时后将冻存管转入液氮罐储存。
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原代细胞实验常见问题:
污染防控:实验全程严格无菌操作,超净工作台使用前紫外消毒30分钟,实验用品需高压灭菌;定期对培养箱、水浴锅等设备进行清洁和消毒,避免细菌、真菌、支原体污染。
细胞老化与分化:原代细胞传代次数有限,通常传至3-5代后会出现老化,需及时冻存早期代次细胞;培养过程中避免过度传代、营养缺乏、环境刺激等因素,防止细胞自发分化。
实验重复性保障:每次实验使用同一来源、同一代次的细胞,严格控制实验条件(如培养基批次、消化时间、培养时间等),设置足够的重复样本,减少实验误差。