转基因油菜品系RT-73核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）

 产品介绍：

检测原理与目的

检测原理：基于 实时荧光定量 PCR（qPCR） 技术，采用 TaqMan 荧光探针法。试剂盒中含有针对 RT-73 品系特异性边界序列（如 CP4-EPSPS 基因与油菜基因组的连接区）设计的引物和探针。在 PCR 扩增过程中，随着目标 DNA 片段的指数级扩增，探针被酶切降解，释放出荧光信号（通常为 FAM 通道）。仪器实时监测荧光信号的累积，并根据 Ct 值（循环阈值） 判定结果。

核心目的：用于油菜及其衍生产品（如菜籽油、饲料等）中 RT-73 转基因品系 的高特异性检测和定量分析。

特异性鉴定：专一性地检测样品中是否含有 RT-73 品系。

定量分析：通过建立标准曲线，计算样品中 RT-73 品系的拷贝数或占总油菜基因组的百分比。

�� 产品核心参数与组成

该试剂盒通常包含以下配置：

项目  详细信息

检测方法  实时荧光定量 PCR (TaqMan 探针法)

检测靶标  转基因油菜品系 RT-73

产品规格  48T (即 48 次测试)

检测限  最低检测限可达 0.1% (部分产品可达 1×10³ copies/mL)

主要组分  A-RT-73-P (引物探针混合液)、NG-P (阴性对照)、PG-RT-73-P (阳性对照)

��️ 操作流程

样本处理：提取待测样本（如油菜叶片、种子、饲料等）的基因组 DNA。

试剂准备：在冰上将引物探针混合液与 qPCR 预混液按比例混合。

加样：将 DNA 模板、阴性对照（无菌水）和阳性对照（试剂盒提供）加入到反应体系中。

qPCR 扩增：将反应板放入荧光定量 PCR 仪（如 ABI 7500、CFX 96 等）中，运行两步法程序：

预变性：95℃ 10 分钟

扩增循环：95℃ 15 秒 → 60℃ 1 分钟 (采集荧光)，40-45 个循环。

结果分析：仪器自动分析扩增曲线和 Ct 值。

�� 结果判读标准

结果类型  判读标准  解释

阳性 (+)  扩增曲线呈典型“S”型，且 Ct 值 ≤ 36-40。  样品中检测到 RT-73 基因片段，判定为含有转基因油菜品系 RT-73。

阴性 (-)  无 Ct 值，或 Ct 值 ≥ 阈值，无指数增长期。  样品中未检测到 RT-73 基因片段，判定为阴性。

无效  阳性对照未扩增，或阴性对照出现扩增。  实验失败（可能存在试剂污染或失效），结果无效。

⚠️ 注意事项

防止污染：由于该方法灵敏度极高，建议在独立的洁净区域进行操作，并使用带滤芯的枪头。

避光保存：反应液中的荧光染料对光敏感，试剂应避光保存和使用。

内源基因对照：为了确保检测结果的准确性（排除假阴性），建议同时使用 油菜内源基因检测试剂盒（如油菜 PEP 基因或 CruA 基因）对样本进行检测，以确认样本 DNA 提取成功且无 PCR 抑制物。

标准依据：该检测方法通常参照《GB/T 19495.3-2004 转基因产品检测 核酸提取纯化方法》等相关标准进行。

公司正在出售的产品：

实验操作规范

严格分区操作：试剂配制区、样本处理区、扩增区需物理隔离，防止气溶胶污染。

每次实验需设置阴性对照（无模板DNA）、阳性对照（已知PAT基因样本）及空白对照（仅缓冲液）。

加样时避免过量或不足，推荐低容量反应管以提高热传导率。

污染防控

定期监测实验室空气、加样枪及仪器表面污染，可通过擦拭采样后扩增验证。

扩增产物需在专用区域处理，避免开盖时形成气溶胶污染。