葡萄糖氧化酶（GOD）活性测定试剂盒 新品

葡萄糖氧化酶（GOD）活性检测试剂盒说明书

                                                  微量法 100管/96样

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定                                             

测定意义：

GOD（EC 1.1.3.4）广泛存在于动物和植物中，催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸，并产生H2O2，是生物体中产生活性氧的代谢途径之一。

测定原理：

GOD催化葡萄糖氧化产生H₂O₂，过氧化物酶在有氧存在时催化H₂O₂分解产生的氧又将邻联茴香胺氧化生成有色物质，颜色深浅与葡萄糖氧化酶活性成线性关系。

自备仪器和用品：

酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、96孔板、研钵、冰、蒸馏水。

样品处理：

1. 组织处理：称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆；8000g，4°C离心 10min，取上清，置冰上待测。 

2. 细菌/细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清，按照每500万细菌/细胞加入1mL提取液，超声波破碎（200W，超声3s，间隔10s，重复30次）。8000g，4°C离心10min，取上清，置冰上待测。

3. 血清（浆）：直接检测。

测定步骤：

1.酶标仪预热30 min以上，调节波长至500 nm，蒸馏水调零。

2.GOD工作液的配制：取15 mL试剂一加3 mL试剂二混匀（现配现用）。

3.样品测定前将GOD工作液与试剂三（工作液）放入37°C水浴中保温。

4.按操作表依次加入各试剂：

将上述试剂按顺序加入96孔板中后混匀，加样本的同时开始计时；在500 nm波长下记录20秒时的初始吸光度A1及2小时20秒时的吸光度A2。计算ΔA=A2-A1。

活性计算：

1. 动物组织GOD活力的计算

（1）按蛋白浓度计算

单位的定义：每mg组织蛋白在反应体系中每小时催化产生1μmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。

GOD（U/mg prot）=ΔA÷d÷ε×V反总÷(cpr×V样本)÷T=1.111×ΔA÷Cpr

（2）按样本质量计算

单位的定义：每g组织在反应体系中每小时催化产生1μmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。

GOD（U/g 质量）=ΔA÷d÷ε×V反总÷(W÷V提取×V样本)÷T=1.111×ΔA÷W

（3）血清（浆）GOD活力的计算

单位的定义：每mL血清（浆）在反应体系中每小时催化产生1μmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。

GOD（U/mL）=ΔA÷d÷ε×V反总÷V样本÷T=1.111×ΔA

（4）细菌/细胞GOD活力的计算

单位的定义：每1万细菌/细胞在反应体系中每小时催化产生1μmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。

GOD（U/104 cell）=ΔA÷d÷ε×V反总÷(500÷V提取×V样本)÷T=2.222×10-3×ΔA

V反总：反应总体积，0.2mL；V样本：加入样本体积，0.02mL；V提取，加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌/细胞数量，500万；d：光径，0.6cm；ε：氧化型邻联茴香胺消光系数，7.5 mL/μmol/cm；T：反应时间，2h。

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