樟子松枯梢病 新品

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樟子松枯梢病是由病原菌引起的樟子松病害，主要病原菌为松枯梢病菌。它可侵染樟子松的新梢、叶片等部位，引发枯梢病，导致新梢枯萎、叶片脱落，严重影响樟子松的生长和观赏价值。该病害通过病原菌的孢子进行传播，在适宜的环境条件下容易大量发生，在森林病理学和林业病虫害防治研究中具有重要意义。
培养基  马铃薯浸粉：6.0，葡萄糖：20.0，琼脂：20.0，pH5.6±0.2（25℃）

生长条件  28℃，5-7天，好氧

存储条件  2-8℃

安全等级  1

形态  小型丝状真菌，在 PDA 培养基上菌落明显，菌丝白色，密集旺盛，向平板边缘蔓延生长，平板背面黄色。

分离基物  樟子松

模式菌株  no

操作步骤  ①准备上述平板1-2块；②试管斜面表面消毒后，在安全柜中打开；③用无菌接种锄和接种铲切块（见附页），0.5×0.5cm2小正方形块；④将小正方形块平放至平板中心，琼脂表面上；⑤将平板正置于上述培养条件下培养，菌种长出即可使用。

共享方式  公益性共享

菌种保存:

低温、干燥和隔绝空气是使微生物代谢能力降低的重要因素，所以，菌种保藏方法虽多，但都是根据这三个因素而设计的。

保藏方法大致可分为以下几种：

1．传代培养 保藏法

又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等（后者作保藏厌氧细菌 用），培养后于4—6℃冰箱内保存。

2．液体石蜡覆盖保藏法

是传代培养的变相方法，能够适当延长保藏时间，它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡，一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡，另一方面可阻止氧气进入，以减弱代谢作用。

3．载体保藏法

是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。

4．寄主保藏法

用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物，如病毒、立克次氏体、螺旋体等，它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代，此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。

5．冷冻保藏法

可分低温冰箱（-20—-30℃，-50—-80℃）、干冰酒精快速冻结（约-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法。

6．冷冻干燥保藏法

先使微生物在极低温度（-70℃左右）下快速冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分（真空干燥）。

有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液，以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。保护性溶质可通过氢和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。保护剂有牛乳、血清、糖类、甘油、二甲亚砜等。

菌种活化与培养:

菌种活化

从冻存管或斜面培养基中取出菌种，接种至新鲜培养基中

在适宜条件下（如37°C，摇床培养）进行预培养，使菌种恢复活性。

扩大培养

将活化后的菌液按一定比例接种至新鲜培养基中。

控制培养条件（温度、转速、通气量等），确保菌体生长处于对数期。

菌液浓度测定

使用分光光度计测定OD600值，评估菌液浓度。

根据实验需求调整菌液浓度。

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