人软骨细胞永生化细胞专用培养基

人软骨细胞永生化细胞专用培养基

商品属性：

产品介绍：

人软骨细胞永生化细胞专用培养基由团队精心优化，经过长期测试，本产品可保持人软骨细胞永生化细胞 最佳的生长状态。

本产品中已包含人软骨细胞永生化细胞生长所需的各种成分，无需添加任何成分，可直接用于人软骨细胞永生化细胞的培养。

软骨细胞培养体系      500 ml

产品主要成分

软骨细胞基础培养基         440 ml

软骨细胞培养添加剂    5 ml

特级胎牛血清           50 ml

P/S青霉素-链霉素    5 ml

运输和保存

运输：放置于含有生物冰袋的保温箱中低温运输

保存方法：    2℃～8℃，避光，保存2个月；-20℃，避光，保存6个月。
质量控制

实验原理：

以DMEM/F12培养基为基础，添加10%优质胎牛血清、1%双抗、50μg/mL抗坏血酸及10ng/mL转化生长因子-β（TGF-β），模拟人软骨永生化细胞的软骨组织微环境。培养基中的成分可促进细胞增殖并维持其软骨细胞特性（如Ⅱ型胶原、蛋白多糖合成），用于骨关节炎、软骨损伤修复等疾病的研究及药物评价。
操作要点：

1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。

2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内完全解冻，使细胞能尽快通过最易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。

4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。

5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。

6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
使用方法：

（一）常规使用步骤

培养基从 2~8℃取出，37℃水浴预热 15~20min，避免冷刺激细胞。

超净台内用 75% 酒精擦拭培养基瓶身，无菌操作开封。

吸弃培养瓶中旧培养基，加入预热的专用培养基（T25 瓶加 5~6mL，T75 瓶加 12~15mL）。

置于37℃、5% CO₂、饱和湿度培养箱培养。

（二）细胞复苏

液氮取出冻存管，37℃快速融化（1~2min），75% 酒精消毒后转入超净台。

细胞悬液转移至含 5mL 预热专用培养基的 15mL 离心管，1000rpm（200g）离心 3min，弃上清。

加 5mL 专用培养基重悬，转入 T25 培养瓶，37℃培养，次日换液去除死细胞。

（三）细胞传代（80~90% 汇合度）

吸弃旧培养基，无菌 PBS（无 Ca²⁺/Mg²⁺）洗细胞 1~2 次，吸弃 PBS。

T25 瓶加 1mL 0.25% 胰酶 - EDTA，37℃消化1~3min，显微镜下见细胞变圆、间隙增大即终止。

加 3~4mL 专用培养基终止消化，轻柔吹打至单细胞悬液，1000rpm 离心 3min，弃上清。

专用培养基重悬，按1:3~1:4分瓶，补足培养基后 37℃培养。

（四）细胞冻存

传代步骤收集细胞，离心弃上清。

冻存液（90%FBS+10%DMSO）重悬，密度1~3×10⁶细胞 / 管。

分装入冻存管，程序降温盒 - 80℃过夜，次日转入液氮长期保存。
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