人成骨细胞永生化细胞专用培养基 新品

产品介绍：

人成骨细胞永生化细胞专用培养基由团队精心优化，经过长期测试，本产品可保持人成骨细胞永生化细胞 最佳的生长状态。

本产品中已包含人成骨细胞永生化细胞生长所需的各种成分，无需添加任何成分，可直接用于人成骨细胞永生化细胞的培养。

成骨细胞培养体系      500 ml

产品主要成分

成骨细胞基础培养基         440 ml

成骨细胞培养添加剂    5 ml

特级胎牛血清      50 ml

P/S青霉素-链霉素       5 ml

运输和保存

运输：放置于含有生物冰袋的保温箱中低温运输

保存方法：2℃～8℃，避光，保存2个月；-20℃，避光，保存6个月。
质量控制

实验原理：

以α-MEM培养基为基础，添加10%优质胎牛血清、1%双抗、10mM β-甘油磷酸钠及50μg/mL抗坏血酸，模拟人成骨永生化细胞的骨组织微环境。培养基中的成分可促进细胞增殖并维持其成骨分化特性（如碱性磷酸酶活性、矿化结节形成），用于骨质疏松症、骨损伤修复等骨科疾病的研究及药物评价。

使用方法：

1. 培养基配制（若为干粉或基础培养基）

将500ml基础培养基溶解于适量超纯水中，搅拌均匀。

依次加入5ml生长添加剂、10ml特级胎牛血清和5ml双抗，轻轻摇匀。

用无菌滤膜（0.22μm孔径）对混合后的培养基进行过滤除菌，转移至无菌容器中备用。

2. 细胞培养操作

（1）复苏细胞

将含有1ml细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中，轻轻摇晃加速解冻。

解冻后，将细胞悬液转移至无菌离心管中，加入4ml完全培养基混合均匀。

1000rpm离心3min，弃去上清液，加入1-2ml完全培养基重悬细胞。

将细胞悬液接种至T25培养瓶或6cm培养皿中，补充适量完全培养基，置于37℃、5%CO₂培养箱中培养过夜，第二天换液并检查细胞密度。

（2）传代培养

当细胞密度达到80%-90%时，进行传代操作。首先弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

加入1ml消化液（0.25%Trypsin-0.02%EDTA）浸润所有细胞，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-3min，显微镜下观察细胞大部分变圆并脱落时，迅速拿回操作台。

轻敲培养瓶，加入2-3ml完全培养基终止消化，轻轻吹打制成单细胞悬液。

将细胞悬液转移至无菌离心管，1000rpm离心5min，弃去上清液，加入1-2ml完全培养基重悬细胞。

按1:2的比例将细胞悬液接种至新的培养瓶或培养皿中，补充完全培养基至8ml，置于培养箱中继续培养。

（3）细胞冻存

待细胞生长状态良好时，收集细胞悬液，1000rpm离心4min，弃去上清液，用PBS清洗一遍。

加入无血清冻存液，调整细胞密度至5×10⁶～1×10⁷/mL，轻轻混匀。

将细胞悬液分装至冻存管中，每管1ml，做好标记。

将冻存管放入-80℃冰箱预冻24h后，转入液氮罐中长期储存。

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注意事项：

整个操作过程必须严格遵守无菌操作规范，避免细菌、真菌等微生物污染培养基和细胞。

运输用的灌液培养基不能再用于培养细胞，收到细胞后需更换为按照说明书新配制的完全培养基。

为保证细胞存活率，收到冻存细胞后请立即解冻复苏，若无法立即操作，冻存细胞可在-80℃条件下保存1个月。

首次传代建议采用1:2的传代比例，后续可根据细胞生长情况调整传代比例。

产品仅供科学研究使用，不可用于动物或人类疾病的治疗及临床诊断。