大鼠（Rat）活性氧簇（ROS）ELISA试剂盒 新品

大鼠（Rat）活性氧簇（ROS）ELISA试剂盒‌是一种用于科研实验中定量检测大鼠血清、血浆、组织匀浆等样本中活性氧簇（ROS）含量的专用工具，广泛应用于氧化应激、炎症、衰老及疾病机制研究等领域。

该类试剂盒普遍采用‌双抗体夹心法（ELISA）‌，通过特异性抗体包被微孔板，结合样本中的ROS，再与酶标抗体反应，经显色后在450nm波长下测定吸光度（OD值），最终通过标准曲线计算ROS浓度。

产品参数：

‌检测原理‌ 双抗体一步夹心法ELISA

检测样本类型‌ 血清、血浆、组织匀浆、细胞上清液等液体样本

‌灵敏度‌ 最低检测浓度可低至 ‌1.0 ng/mL 以下‌

‌检测范围‌ 多数为 ‌15–480 U/mL 或 15–360 IU/mL‌

‌反应时间‌ 约 ‌2–3小时‌（温育+洗涤+显色）

‌保存条件‌ ‌2–8℃冷藏避光‌，避免反复冻融

‌有效期‌ 一般为 ‌6个月‌

‌注意事项‌ 样本中含NaN₃会抑制HRP活性，影响结果；溶血样本可能干扰检测

操作步骤：

‌标准品稀释‌：按说明书梯度稀释，设置6个浓度点（如0、15、30、60、120、240 U/mL）。

‌加样‌：每孔加入50μL标准品或待测样本，空白孔不加。

‌孵育‌：37℃恒温箱孵育60分钟。

‌洗板‌：手工或洗板机洗涤5次，拍干。

‌加酶标抗体‌：每孔加100μL HRP标记抗体，37℃孵育60分钟。

‌再次洗板‌：彻底清洗去除未结合成分。

‌显色‌：加入底物A+B各50μL，37℃避光显色15分钟。

‌终止反应‌：每孔加50μL终止液，颜色由蓝变黄。

‌读数‌：在15分钟内于450nm波长下测OD值。

‌计算‌：绘制标准曲线，代入样品OD值求浓度，乘以稀释倍数得实际浓度。

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实验操作流程：

‌1、试剂与样本准备‌

所有试剂从2–8℃冷藏环境中取出后，‌室温平衡15–30分钟‌。

20×洗涤缓冲液按 ‌1:20比例用蒸馏水稀释‌（如1 mL浓缩液 + 19 mL水）。

标准品用标准品稀释液进行梯度稀释，通常为6个浓度点（如0、15、30、60、120、240 U/mL）。

2‌、加样‌

设置标准品孔和待测样本孔。

每孔先加入 ‌40 μL样本稀释液‌，再加入 ‌10 μL待测样本‌（最终稀释倍数为5倍）。

标准品孔直接加入50 μL不同浓度标准品。

空白对照孔不加样本和酶标试剂，其余步骤相同。

‌3、温育（第一次）‌

每孔加入 ‌100 μL HRP标记的检测抗体‌。

用封板膜密封微孔板，‌37℃恒温箱温育60分钟‌。

避免强光直射，防止试剂失活。

‌4、洗涤‌

小心揭去封板膜，弃去孔内液体。

每孔加入 ‌350 μL洗涤液‌，静置30秒后甩干。

重复洗涤 ‌5次‌，最后一次在吸水纸上拍干，确保无残留液滴。

‌5、显色反应‌

每孔加入 ‌底物A和B各50 μL‌，轻轻震荡混匀。

‌37℃避光孵育15分钟‌，TMB底物在HRP催化下由无色变为蓝色。

‌6、终止反应‌

每孔加入 ‌50 μL终止液‌，颜色由蓝迅速转为黄色。

终止后需在 ‌15分钟内完成OD值测定‌，避免颜色漂移影响结果。

‌7、测定与计算‌

使用酶标仪在 ‌450 nm波长‌ 下读取各孔OD值，以空白孔调零。

以标准品浓度为横坐标、OD值为纵坐标，绘制标准曲线。

根据样品OD值查出对应浓度，并 ‌乘以稀释倍数（×5）‌ 得实际ROS浓度。