大鼠1,3-βD葡葡糖苷酶(1,3-βD-Glu)ELISA试剂盒 新品

大鼠1,3-βD葡葡糖苷酶(1,3-βD-Glu)ELISA试剂盒‌是一种用于科研实验中定量检测大鼠血清、血浆、组织匀浆、细胞上清液等样本中1,3-βD葡葡糖苷酶含量的专用工具，广泛应用于免疫学、代谢研究及炎症相关机制探索等领域。

该试剂盒采用‌双抗体夹心法（ELISA）‌，通过特异性抗体包被微孔板，捕获样本中的目标酶，再与HRP标记的检

测抗体结合，经TMB显色后在450nm波长下测定吸光度（OD值），最终根据标准曲线计算酶浓度。

参数类别‌：

产品名称：大鼠1,3-βD葡葡糖苷酶(1,3-βD-Glu)ELISA试剂盒

英文名称：3-βD-Glu ELISA Kit

货号：Y-E1568

规格：48T/96T

‌检测原理‌ 双抗体夹心法ELISA（一步法）

‌目标物‌ 大鼠1,3-βD葡葡糖苷酶（1,3-βD-Glu）

‌检测样本类型‌ 血清、血浆、尿液、脑脊液、组织匀浆、细胞上清液等液体样本

‌灵敏度‌ 最低检测浓度 ‌< 10 pg/mL‌，部分型号可达 ‌< 1 pg/mL‌

‌检测范围‌ 通常为 ‌15–480 pg/mL‌

‌试剂盒规格‌ 48T / 96T（即支持48或96次独立检测）

‌保存条件‌ ‌2–8℃冷藏避光保存‌，避免冷冻

‌有效期‌ 一般为 ‌6个月‌

‌反应时间‌ 约 ‌2–3小时‌（含温育、洗涤、显色等步骤）

‌显色系统‌ TMB底物显色，HRP酶催化下呈蓝色，加终止液后转为黄色

‌检测波长‌ ‌450 nm‌（需使用酶标仪读取OD值）

‌标准曲线绘制‌ 以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标，拟合线性回归曲线（R² ≥ 0.99）

‌特异性‌ 不与其它可溶性结构类似物发生交叉反应，特异性强

‌重复性‌ 板内、板间变异系数均 ‌< 15%‌，部分产品可低至 ‌< 10%‌

‌注意事项‌ 含NaN₃样本会抑制HRP活性，影响结果准确性；避免反复冻融样本

具体步骤如下：

一、固相抗体包被‌

使用高纯度的抗大鼠1,3-βD葡葡糖苷酶抗体预先包被在微孔板表面，形成“固相抗体”层，用于特异性捕获目

标抗原。

‌二、加样与结合‌

向微孔中加入标准品或待测样本（如血清、血浆、组织匀浆等），样本中的1,3-βD葡葡糖苷酶与固相抗体结合

，未结合的成分在后续洗涤中被去除。

‌三、酶标

加入HRP（辣根过氧化物酶）标记的检测抗体，该抗体与已结合的目标酶形成“抗体-抗原-酶标抗体”复合物

，构成夹心结构。

‌四、显色反应‌

加入TMB显色底物，HRP催化TMB生成蓝色产物，在酸性终止液作用下转变为黄色，颜色深浅与样本中1,3-β

D葡葡糖苷酶含量呈正相关。

‌五、定量测定‌

使用酶标仪在‌450nm波长‌下测定各孔吸光度（OD值），通过标准品建立的标准曲线计算出样本中目标物的实

际浓度。

注意事项：

1. ‌试剂准备阶段‌

所有试剂使用前需从 ‌2–8℃冷藏环境取出，室温（18–25℃）平衡15–30分钟‌，避免温度差异影响反应活性。

浓缩洗涤液（如30×或20×）若出现结晶，可置于 ‌室温或37℃水浴中轻轻摇动助溶‌，完全溶解后再进行稀释。

洗涤液按要求比例稀释（如1:30），现用现配，未用完的应于4℃保存并在一周内使用。

2. ‌样本采集与处理‌

‌血清/血浆样本‌：采集后尽快离心分离（1000×g，10–15分钟），避免溶血或高血脂干扰检测。

‌组织匀浆样本‌：

称取不少于50mg组织，加入适量PBS（pH 7.4）或生理盐水（推荐1:3～1:5比例）进行匀浆；

匀浆过程建议在冰浴中进行，防止蛋白降解；

匀浆后于2000–5000×g离心15–20分钟，取上清用于检测。

‌细胞上清液‌：收集后1000×g离心10分钟去除颗粒物，避免堵塞微孔板。

所有样本若不立即检测，应 ‌分装后于-20℃或-80℃保存，仅允许一次冻融‌，反复冻融会导致酶活性下降。

3. ‌加样与温育操作‌

加样时尽量将液体加至孔底中部，‌避免触碰孔壁‌，轻轻晃动微孔板使混合均匀。

每孔加样量为50μL，标准品与待测样本均需设置复孔以提高数据可靠性。

温育过程中必须使用 ‌封板膜密封微孔板‌，防止污染和蒸发，‌37℃恒温孵育30分钟‌。

4. ‌洗涤步骤‌

洗涤是影响背景值和重复性的关键环节。每次洗涤需 ‌加满洗涤液（约300–350μL/孔）‌，静置30秒后甩干。

重复洗涤 ‌5次‌，最后一次在吸水纸上轻拍彻底去除残留液体，避免交叉污染。

5. ‌显色与终止‌

显色剂A和B应 ‌现配现用‌，避光操作，加入后轻轻震荡混匀，‌37℃避光孵育10–15分钟‌。

显色时间不宜过长，否则可能导致信号饱和或非线性响应。

终止液加入后颜色由蓝变黄，‌必须在15分钟内完成OD值测定‌，防止读数漂移。

6. ‌结果读取与计算‌

使用酶标仪在 ‌450nm波长‌ 下读取各孔吸光度（OD值），以空白孔调零。

绘制标准曲线时，建议采用四参数拟合（4PL）或线性回归（R² ≥ 0.99），剔除异常点。

若样本OD值超出标准曲线范围，需用样本稀释液稀释后重测，结果乘以相应稀释倍数。

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