DNase I 新品

基本信息‌

‌中文名称‌：DNase I

货号：P-PR1447

规格：1000U（1U/ul）

‌英文名称‌：Deoxyribonuclease I
作用机制：一种非特异性核酸内切酶，能高效消化单链或双链DNA，水解产物5'端为磷酸基团、3'端为羟基。其活性依赖钙离子，可被镁离子或二价锰离子激活：镁离子存在时随机剪切双链DNA任意位点；二价锰离子存在时在同一位点剪切DNA双链，形成平末端或1 - 2个核苷酸突出的粘末端。 

适用样本：RNA样本（去除残留基因组DNA）、体外转录后RNA产物（去除残留DNA模板）、RNA建库测序前的总RNA（配合探针去除rRNA）、待标记的双链DNA（用于缺口平移法标记探针）等。
产品简介

DNase I即脱氧核糖核酸酶I，是一种非特异性的核酸内切酶，可随机水解单链或双链DNA的磷酸二酯键，生成带有5'-磷酸基团和3'-羟基末端的单核苷酸或寡核苷酸片段。

酶活特性

激活因子：活性依赖Ca²⁺，并需Mg²⁺或Mn²⁺激活

Mg²⁺存在时：随机切割双链DNA的单链，产生切口

Mn²⁺存在时：在双链DNA的同一位置切割两条链，产生平末端或1-2个核苷酸突出的粘末端

活性定义：37℃、10分钟内完全降解1μg pBR322质粒DNA所需的酶量为1个活性单位

检测条件：40mM Tris-HCl(pH8.0)、10mM MgSO₄、1mM CaCl₂、1μg pBR322 DNA

产品规格与组成

产品类型 组成成分 储存条件

纯酶制剂 5 U/μl DNase I、10×反应缓冲液 -20℃保存1年

试剂盒形式 DNase I、10×反应缓冲液、RNase-Free水 -20℃保存1年

高浓度溶液 10mg/mL DNase I溶液（1500-2500U） -20℃保存1年

主要用途

RNA样品制备：去除RNA中的基因组DNA污染，适用于RT-PCR等敏感实验

分子生物学研究：

DNase I足迹实验：研究DNA-蛋白质相互作用

缺口平移技术：制备标记的DNA探针

构建随机DNA片段文库

细胞生物学：TUNEL检测中作为阳性对照，剪切基因组DNA

操作方法

常规DNA消化反应体系（50μl）

成分 体积

10×DNase I Buffer 5μl

MgCl₂（25mM） 2μl

CaCl₂（10mM） 1μl

DNA样品 Xμl

DNase I（1U/μl） 1-5μl

RNase-Free水 补至50μl

反应条件：37℃孵育10-30分钟，根据DNA量调整时间

柱上消化法（RNA纯化试剂盒配套使用）

向吸附柱中加入80μl DNase I混合液（52μl水+8μl 10×Buffer+20μl酶）

20-30℃孵育15分钟

加入350μl洗涤缓冲液离心去除酶

失活与抑制方法

热失活：加入EDTA至终浓度2.5mM，65℃加热10分钟

化学失活：酚-氯仿抽提去除酶

抑制剂：

金属离子螯合剂（如EDTA）

锌离子（毫摩尔浓度）

0.1% SDS

高盐浓度（50-100mM以上）

还原剂（DTT、巯基乙醇）

注意事项

RNase-free版本可直接用于RNA处理，普通版本可能含RNase，需谨慎使用

避免反复冻融，建议分装保存

操作时使用无RNase的枪头和离心管，防止RNA降解

酶对剪切力敏感，混匀时避免剧烈涡旋，建议轻轻颠倒离心管

反应体系中Mg²⁺和Ca²⁺的浓度对酶活有显著影响，需严格按照缓冲液配方操作

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