miRNA茎环染料法荧光定量PCR试剂盒 新品

基本信息‌

‌中文名称‌：miRNA茎环染料法荧光定量PCR试剂盒

货号：P-PR1431

规格：200反应、400反应

‌英文名称‌：miRNA Stem-loop Dye-based Quantitative PCR Kit
作用机制：设计与miRNA序列互补的茎环结构反转录引物，该引物与miRNA特异性结合后进行反转录，生成含有茎环结构的cDNA，再用特异性引物对cDNA进行PCR扩增，通过染料与扩增的双链DNA结合产生的荧光信号定量miRNA。 

适用样本：含miRNA的总RNA样本，如动植物组织总RNA、细胞系总RNA、体液总RNA等。
产品简介

本试剂盒专为miRNA定量检测设计，采用SYBR Green I嵌合荧光法，搭配茎环引物技术，解决miRNA片段短、易非特异扩增的痛点。试剂盒组成完整，包含2×miRNA SYBR Master mix、Tag Primer、ddH₂O，可满足多次实验需求，无需额外搭配基础试剂。

核心优势

特异性强：热启动聚合酶+茎环引物设计双重保障，有效避免引物二聚体和非特异扩增，精准靶向miRNA

灵敏度高：优化后的反应缓冲液提升PCR扩增效率，荧光信号更强，灵敏度优于同类产品，适合低丰度miRNA检测

便捷性好：购买即免费提供上下游引物设计和序列信息，无需自行摸索，大幅提升实验成功率

试剂盒组成

组分 规格（200T） 保存条件

2×miRNA SYBR Master mix 10mL -20℃避光保存

Tag Primer 1mL -20℃避光保存

ddH₂O 10mL -20℃保存

注：所有组分无核酸酶残留，仅用于科研；单次使用量较少时，建议小份分装保存，避免反复冻融

实验步骤

一、miRNA逆转录（需搭配茎环法逆转录试剂盒）

配制逆转录反应体系（10μL体系）：

5×RT Buffer：2μL

RT Enzyme Mix：0.5μL

茎环引物（1μM）：1μL

总RNA样本：1-5μL

RNase-free Water：补至10μL

逆转录反应程序：

16℃ 30分钟

42℃ 30分钟

85℃ 5分钟

4℃ 保存

二、荧光定量PCR检测

配制PCR反应体系（20μL体系）：

2×miRNA SYBR Master mix：10μL

上游引物（10μM）：0.4μL

下游引物（10μM）：0.4μL

cDNA模板：2μL

ddH₂O：7.2μL

PCR扩增程序（3段法）：

95℃ 10分钟（激活聚合酶）

95℃ 10秒 → 60℃ 20秒 → 70℃ 20秒（收集荧光信号），40个循环

溶解曲线分析：95℃ 15秒 → 60℃ 1分钟 → 95℃ 15秒

注意事项

防污染：qPCR灵敏度极高，气溶胶污染会导致假阳性，所有操作需在超净台中进行，使用专用枪头和离心管

模板质量：确保模板无蛋白酶、核酸酶污染，浓度均匀，避免因模板降解或浓度过高/过低导致扩增异常

反应条件：根据引物Tm值、目标片段长度调整退火温度和延伸时间，复杂样本可适当优化循环数

试剂保存：所有试剂需-20℃避光保存，反复冻融会破坏酶活性和荧光物质，建议小份分装使用

操作规范：配制反应体系时轻柔混匀，防止气泡产生；避免强光照射试剂

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