RCA滚环扩增试剂盒 新品

基本信息‌

‌英文名称‌：RCA Rolling Circle Amplification Kit
作用机制：基于滚环扩增技术，利用环状DNA模板，在DNA聚合酶的作用下，以环状模板为引物进行滚环式DNA合成，可产生大量与环状模板互补的重复线性DNA片段，实现对靶序列的指数级扩增，具有高灵敏度和特异性。 

适用样本：环状DNA模板，如质粒DNA、病毒环状DNA、人工构建的环状探针等，适用于病原体检测、基因突变分析、单核苷酸多态性（SNP）检测等实验。
产品概述
用于滚环扩增（Rolling Circle Amplification, RCA）技术的专用试剂盒，包含环状DNA模板引物、高性能DNA聚合酶、反应缓冲液、dNTP等关键组分。RCA是一种恒温核酸扩增技术，通过环状DNA模板引导DNA聚合酶进行滚动式合成，可实现单拷贝核酸的指数级扩增，具有高灵敏度、高特异性的特点。该试剂盒适用于微量核酸检测、单核苷酸多态性（SNP）分析、生物传感器信号放大、病原体高灵敏检测等研究领域。
产品特点
恒温扩增技术：37℃恒温反应，无需热循环仪即可实现核酸扩增

单拷贝检测能力：通过滚环复制实现单分子核酸的指数级放大

高特异性识别：利用锁式探针的序列特异性，有效区分单核苷酸多态性

可视化检测：扩增产物可直接通过荧光染色或比色法观察结果
核心PCR试剂及使用方法

1. Taq DNA聚合酶

作用：催化DNA链的延伸，是PCR反应的核心酶

使用方法：

通常按0.5-2U/25μL体系添加，具体用量参照试剂说明书

酶对温度敏感，需在冰上操作，避免反复冻融

最后加入酶液，防止提前激活导致非特异性扩增

2. dNTP混合液

作用：提供DNA合成的原料（dATP、dTTP、dCTP、dGTP）

使用方法：

终浓度一般为200μmol/L每种dNTP，总浓度800μmol/L

避免反复冻融，可分装成小体积储存

注意pH值，过酸或过碱会抑制聚合酶活性

3. PCR缓冲液

作用：提供酶促反应的适宜环境（pH、离子浓度）

使用方法：

通常为10×浓度，使用时稀释至1×终浓度

含Mg²+的缓冲液需注意Mg²+浓度，一般1.5-2.5mmol/L为最优范围

部分缓冲液含KCl、Tris-HCl等成分，无需额外添加

4. 引物（上游/下游）

作用：定位扩增区域，引导DNA合成起始

使用方法：

终浓度一般为0.1-1μmol/L，根据引物Tm值调整

引物需用TE缓冲液或无菌水溶解，浓度计算准确

避免引物降解，-20℃分装储存，避免反复冻融

5. 模板DNA

作用：提供扩增的原始DNA模板

使用方法：

模板浓度一般为1ng-1μg/25μL体系，根据模板类型调整

基因组DNA需充分纯化，避免蛋白、RNA等杂质污染

质粒DNA可适当减少用量，一般10-100ng即可

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实验流程

反应体系配制：按1×工作浓度混合预混液、模板（10-100 ng）、引物（0.2-0.5 μM）及无核酸酶水。

PCR程序：

预变性：95℃ 30 sec

扩增循环（40×）：95℃ 5 sec → 60℃ 30 sec（荧光采集）

熔解曲线分析：60-95℃梯度升温。

注意事项

避免反复冻融，推荐分装保存。

熔解曲线需呈现单一峰以确保扩增特异性。

若需绝对定量，建议配套标准品使用。