TUNEL细胞凋亡检测试剂盒 新品

基本信息‌

‌中文名称‌：TUNEL细胞凋亡检测试剂盒

货号：P-PR1504

规格：30T、60T、8孔、16孔

‌英文名称‌：TUNEL Cell Apoptosis Detection Kit
作用机制：利用末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）将荧光标记的dUTP连接到凋亡细胞断裂的DNA 3'羟基末端，通过荧光显微镜或流式细胞仪检测荧光信号，从而识别凋亡细胞。 

适用样本：贴壁细胞、悬浮细胞、组织切片等。
检测原理

细胞发生凋亡时，内源性核酸内切酶会被激活，将基因组DNA切断为180 - 200bp的片段，暴露出大量3'-OH末端。TUNEL（TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling）技术利用末端脱氧核苷酸转移酶（TdT），将带有标记的dUTP连接到这些3'-OH末端，通过荧光显微镜或流式细胞仪即可检测到凋亡细胞。

试剂盒组分（以50次检测规格为例）

组分名称 规格 储存条件

平衡缓冲液 2.5mL -20℃

生物素标记dUTP 50μL -20℃

TdT酶 200μL -20℃

50×蛋白酶K 100μL -20℃

链霉亲和素 - HRP 25μL 4℃避光

DAB显色剂 5mg -20℃

操作流程

一、样本预处理

1. 细胞样本（贴壁/悬浮）

贴壁细胞：PBS洗涤2次，加入4%多聚甲醛室温固定25min；PBS洗涤3次，加入含0.3% Triton X - 100的PBS室温孵育5min通透处理；PBS洗涤3次。

悬浮细胞：1000g离心5min收集细胞，PBS洗涤2次；重悬于4%多聚甲醛中室温固定25min；1000g离心5min弃固定液，PBS洗涤3次；加入含0.3% Triton X - 100的PBS室温孵育5min；PBS洗涤3次。

2. 石蜡组织切片

二甲苯脱蜡2次，每次5 - 10min；依次经100%、95%、85%、70%乙醇梯度水化各5min；蒸馏水洗涤2次。

滴加蛋白酶K工作液（用PBS按1:50稀释50×蛋白酶K），37℃孵育15 - 30min（不同组织孵育时间需优化）；PBS洗涤3次。

3. 冰冻组织切片

4%多聚甲醛室温固定30 - 60min；PBS洗涤3次；加入含0.5% Triton X - 100的PBS室温孵育5min；PBS洗涤3次。

二、阳性/阴性对照设置

阳性对照：样本预处理后，滴加DNase I工作液（10U - 3000U DNase I溶于40mM Tris - HCl pH7.9、10mM NaCl、6mM MgCl₂、10mM CaCl₂溶液），室温 - 37℃孵育10 - 30min；PBS洗涤3次后与样本同步后续操作。

阴性对照：在后续标记反应中，不添加TdT酶，其余步骤与样本一致。

三、标记与显色反应

配制TUNEL反应液：取450μL标记溶液，加入50μL TdT酶，充分混匀，置于冰上备用（现配现用）。

标记反应：在样本上滴加50μL TUNEL反应液（6孔板每孔加100μL），置于湿盒中37℃避光孵育60min；PBS洗涤3次，每次5min。

显色反应：滴加DAB显色液（按说明书用PBS稀释DAB粉末），室温避光孵育5 - 10min，显微镜下观察显色程度；蒸馏水洗涤终止反应。

复染与封片：苏木素或甲基绿复染细胞核3 - 5min，流水冲洗返蓝；经梯度乙醇脱水、二甲苯透明后，用中性树胶封片，光学显微镜下观察。

注意事项

所有试剂使用前请离心集液，微量试剂建议使用高精度移液枪。

TUNEL反应液需现配现用，不宜长期保存；DAB溶液颜色变深呈紫色时禁止使用。

实验过程中注意保持样本湿润，避免液体干涸导致非特异性染色。

不同类型样本的固定、通透及孵育时间需根据实际情况优化调整。

DAB为潜在致癌物，操作时需注意防护，避免直接接触。

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