Lambda核酸外切酶 新品

基本信息‌

‌英文名称‌：Lambda Exonuclease
作用机制：一种5'-3'核酸外切酶，可从双链DNA的5'末端开始降解DNA链，优先降解带有5'磷酸基团的DNA链，产生单链DNA片段，对单链DNA无作用。 

适用样本：双链DNA模板，可用于制备单链DNA、DNA序列分析、重组DNA鉴定等实验，尤其适合处理带有5'磷酸基团的DNA片段。
产品概述
该酶是从大肠杆菌中表达的λ噬菌体核酸外切酶，具有高度的5'→3'外切酶活性，能从双链DNA的5'磷酸化末端开始降解DNA，释放出单核苷酸，而对5'羟基末端的双链DNA几乎无作用。它可用于将双链DNA转化为单链DNA、构建DNA测序模板、去除PCR产物中的引物等实验，在分子克隆、DNA测序和基因分析等领域发挥重要作用。
产品特点
5'磷酸末端特异性：仅从双链DNA的5'磷酸化末端开始降解

单链DNA生成：可将双链DNA高效转化为单链DNA模板

方向特异性：严格按5'→3'方向降解，产物为单核苷酸

测序应用：可用于构建DNA测序模板，提升测序质量
实验前准备

试剂与耗材检查：确认PCR预混液、上下游引物、模板DNA、无酶水等试剂在有效期内，外观无浑浊、沉淀；PCR管、枪头需为无酶无菌规格。

仪器预热：提前10-15分钟启动PCR仪，设置好反应程序，确保仪器达到预设温度。

环境准备：在超净工作台内操作，佩戴无粉手套，避免交叉污染；操作前用75%酒精擦拭台面和移液器。

反应体系配制

冰上操作：将所有试剂放置于冰盒内，避免酶失活。

体系配比（以25μL体系为例）：

PCR预混液（含Taq酶、dNTP、Buffer）：12.5μL

上游引物（10μM）：1μL

下游引物（10μM）：1μL

模板DNA：1-5μL（根据模板浓度调整）

无酶水：补足至25μL

轻柔混匀：用移液器轻轻吹吸混合液3-5次，避免产生气泡；若有气泡可短暂离心去除。

分装体系：将配制好的反应液分装至PCR管中，每管25μL，盖紧管盖。

PCR仪上机反应

程序设置：根据引物Tm值和实验需求设置三步法或两步法程序：

预变性：95℃，3-5分钟

循环阶段：95℃变性30秒，55-65℃退火30秒，72℃延伸（根据片段长度调整，1kb约1分钟），循环25-35次

终延伸：72℃，5-10分钟

保温：4℃。

上机运行：将PCR管放入PCR仪样品槽，确保管盖紧密贴合；启动程序，等待反应完成。

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注意事项

无菌操作：所有试剂和耗材需高压灭菌或无菌处理，避免外源DNA污染

温度控制：酶、dNTP等试剂需-20℃储存，避免反复冻融

体系优化：根据引物Tm值、模板类型调整Mg²+浓度和退火温度

对照设置：每次实验需设置阴性对照（无模板）和阳性对照（已知阳性模板）