超级多重荧光定量PCR试剂盒（探针） 新品

基本信息‌

‌中文名称‌：超级多重荧光定量PCR试剂盒（探针）

货号：P-PR1426

规格：100反应、200反应、500反应

‌英文名称‌：Super Multiplex Quantitative PCR Kit (Probe-based)
作用机制：优化的PCR反应体系搭配多种荧光标记的探针，可在同一反应管中同时对多个靶基因进行扩增和荧光检测，提高检测通量；特殊的热启动聚合酶增强了反应的特异性和灵敏度。 

适用样本：核酸提取物，可用于病原体高通量检测、基因表达谱分析等。
产品简介

本试剂盒专为多重荧光定量PCR检测设计，采用探针法（兼容TaqMan®、Scorpions®等探针类型），可同时对多个靶标基因进行精准定量检测。试剂盒以预混液形式提供，搭配优化的超级热启动聚合酶与反应缓冲液，能在复杂样本中实现高特异性、高灵敏度的基因扩增，40个循环仅需20多分钟即可完成，适用于基因表达分析、病原体检测、SNP分型等多种分子生物学实验。

产品特点

多重检测能力：可同时检测2-10个靶标基因，大幅提升实验效率

超高特异性：超级热启动酶结合探针杂交技术，有效降低非特异性扩增

快速高效：优化的反应体系使40个循环扩增仅需20-25分钟

高灵敏度：最低可检测1pg总RNA或10拷贝的靶基因

抗干扰性强：适配土壤、粪便、血液等复杂样本，重复性好

操作便捷：预混液形式包装，无需复杂试剂配制

试剂盒组成

组分名称 规格（以100次反应装为例）

2×超级多重PCR预混液 1.25ml × 8

ROX校正染料（50×） 50μL

无核酸酶水 10ml

阳性对照（可选） 100μL

阴性对照（可选） 100μL

实验操作步骤

样本准备

核酸提取：采用合适方法提取样本中的DNA或RNA，确保核酸无降解、无抑制剂污染

RNA样本处理：若样本为RNA，需先反转录为cDNA（推荐使用本品牌逆转录试剂盒）

样本定量：用分光光度计或Qubit测定核酸浓度，将所有样本统一稀释至10-100ng/μL

反应体系配制

在冰上配制PCR反应体系，每个反应体系体积推荐为20μL：

试剂组分 体积（20μL体系）

2×超级多重PCR预混液 10μL

ROX校正染料（50×） 0.4μL

上游引物混合物（10μM） 0.8μL

下游引物混合物（10μM） 0.8μL

探针混合物（10μM） 0.4-0.8μL

模板DNA/cDNA 2μL

无核酸酶水 补足至20μL

注：引物和探针的终浓度需根据靶标基因数量和特异性进行优化，推荐终浓度为0.2-0.4μM

上机扩增

将配制好的反应管放入荧光定量PCR仪，设置如下扩增程序：

预变性与酶激活：95℃ 10分钟（激活热启动酶）

PCR循环（40个循环）：

变性：95℃ 15秒

退火延伸：60℃ 1分钟（采集荧光信号）

注：若靶标基因Tm值差异较大，可采用 touchdown PCR 程序或分两步进行退火延伸

结果分析

基线设置：将基线设置在3-15个循环的荧光信号范围内

阈值设置：将阈值线设置在扩增曲线的指数增长期

数据分析：

绝对定量：通过标准曲线计算样本中靶基因的初始拷贝数

相对定量：采用ΔΔCt法计算不同样本间基因表达量的差异

多重检测：需确保各探针的荧光通道无交叉干扰

注意事项

试剂盒所有组分需在-20℃避光保存，避免反复冻融；ROX校正染料可在2-8℃短期保存

实验操作需在无核酸酶环境中进行，使用无菌无酶的吸头和离心管

引物和探针需经PAGE或HPLC纯化，稀释后在-20℃分装保存

若样本中含有PCR抑制剂（如血红素、腐殖酸等），需对样本进行纯化或适当稀释

多重检测时需优化引物和探针浓度，避免引物二聚体和通道间干扰

每次实验需设置阴性对照（无模板）和阳性对照（已知浓度的靶基因）

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