南极热敏UDG 新品

基本信息‌

‌英文名称‌：Antarctic Thermolabile Uracil-DNA Glycosylase (UDG)
作用机制：一种热敏型尿嘧啶-DNA糖基化酶，在常温下可降解含有尿嘧啶的DNA，在高温下（如50-55℃）会快速失活，可用于PCR反应的防污染处理，避免残留的UDG酶对后续PCR产物造成降解。 

适用样本：含有尿嘧啶的DNA样本，如使用dUTP的PCR扩增产物，可用于PCR反应的防污染处理，尤其适合对热敏感的PCR体系。
产品概述
这是一种来源于南极微生物的热敏尿嘧啶-DNA糖苷酶，具有低温活性和高温失活的特性，能够在低温下特异性切除DNA中的尿嘧啶碱基，而在高温（如50℃以上）条件下迅速失活。它主要用于PCR反应中，在预变性阶段通过高温失活，避免对后续扩增产物造成影响，同时有效防止PCR污染，为核酸扩增实验提供更高的特异性和准确性。
产品特点
低温活性：在0-25℃低温下保持活性，可在样本预处理阶段发挥作用

高温快速失活：50℃以上迅速失活，不影响后续PCR扩增反应

防污染功能：特异性降解含尿嘧啶的DNA，有效防止PCR产物交叉污染

极地酶特性：源自南极微生物，适应低温环境，适合特殊实验设计
实验前准备

试剂与耗材检查：确认PCR预混液、上下游引物、模板DNA、无酶水等试剂在有效期内，外观无浑浊、沉淀；PCR管、枪头需为无酶无菌规格。

仪器预热：提前10-15分钟启动PCR仪，设置好反应程序，确保仪器达到预设温度。

环境准备：在超净工作台内操作，佩戴无粉手套，避免交叉污染；操作前用75%酒精擦拭台面和移液器。

反应体系配制

冰上操作：将所有试剂放置于冰盒内，避免酶失活。

体系配比（以25μL体系为例）：

PCR预混液（含Taq酶、dNTP、Buffer）：12.5μL

上游引物（10μM）：1μL

下游引物（10μM）：1μL

模板DNA：1-5μL（根据模板浓度调整）

无酶水：补足至25μL

轻柔混匀：用移液器轻轻吹吸混合液3-5次，避免产生气泡；若有气泡可短暂离心去除。

分装体系：将配制好的反应液分装至PCR管中，每管25μL，盖紧管盖。

PCR仪上机反应

程序设置：根据引物Tm值和实验需求设置三步法或两步法程序：

预变性：95℃，3-5分钟

循环阶段：95℃变性30秒，55-65℃退火30秒，72℃延伸（根据片段长度调整，1kb约1分钟），循环25-35次

终延伸：72℃，5-10分钟

保温：4℃。

上机运行：将PCR管放入PCR仪样品槽，确保管盖紧密贴合；启动程序，等待反应完成。

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注意事项

无菌操作：所有试剂和耗材需高压灭菌或无菌处理，避免外源DNA污染

温度控制：酶、dNTP等试剂需-20℃储存，避免反复冻融

体系优化：根据引物Tm值、模板类型调整Mg²+浓度和退火温度

对照设置：每次实验需设置阴性对照（无模板）和阳性对照（已知阳性模板）