Bst 2.0 DNA/RNA polymerase 新品

基本信息‌

‌英文名称‌：Bst 2.0 DNA/RNA Polymerase
作用机制：一种具有链置换活性的DNA聚合酶，同时具有逆转录酶活性，可以DNA或RNA为模板，催化DNA链的5'到3'方向合成，无需高温变性，可在等温条件下进行扩增反应，如环介导等温扩增（LAMP）。 

适用样本：单链或双链DNA模板、RNA模板，适用于等温扩增实验，如LAMP、RT-LAMP等，尤其适合现场快速检测。
产品概述
这是一种具有DNA聚合酶活性和反转录活性的酶，来源于嗜热菌Bacillus stearothermophilus，具有强大的链置换活性，能够在恒温条件下高效扩增DNA或RNA模板。它无需进行温度循环，适用于恒温扩增技术（如LAMP），可用于快速检测病原体、基因分型、现场快速诊断等场景，为核酸检测提供了一种简便、快速、灵敏的方法，尤其适合资源有限或需要快速出结果的环境。
产品特点
双酶活性兼具：同时具备DNA聚合酶活性和反转录酶活性，可直接以RNA为模板扩增

强链置换能力：高效置换DNA链，无需热循环，适用于等温扩增技术

恒温扩增优势：65℃恒温条件下即可快速扩增，无需PCR仪

长片段合成：可合成长达10kb的DNA片段，适用于复杂模板扩增
实验前准备

试剂与耗材检查：确认PCR预混液、上下游引物、模板DNA、无酶水等试剂在有效期内，外观无浑浊、沉淀；PCR管、枪头需为无酶无菌规格。

仪器预热：提前10-15分钟启动PCR仪，设置好反应程序，确保仪器达到预设温度。

环境准备：在超净工作台内操作，佩戴无粉手套，避免交叉污染；操作前用75%酒精擦拭台面和移液器。

反应体系配制

冰上操作：将所有试剂放置于冰盒内，避免酶失活。

体系配比（以25μL体系为例）：

PCR预混液（含Taq酶、dNTP、Buffer）：12.5μL

上游引物（10μM）：1μL

下游引物（10μM）：1μL

模板DNA：1-5μL（根据模板浓度调整）

无酶水：补足至25μL

轻柔混匀：用移液器轻轻吹吸混合液3-5次，避免产生气泡；若有气泡可短暂离心去除。

分装体系：将配制好的反应液分装至PCR管中，每管25μL，盖紧管盖。

PCR仪上机反应

程序设置：根据引物Tm值和实验需求设置三步法或两步法程序：

预变性：95℃，3-5分钟

循环阶段：95℃变性30秒，55-65℃退火30秒，72℃延伸（根据片段长度调整，1kb约1分钟），循环25-35次

终延伸：72℃，5-10分钟

保温：4℃。

上机运行：将PCR管放入PCR仪样品槽，确保管盖紧密贴合；启动程序，等待反应完成。

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注意事项

无菌操作：所有试剂和耗材需高压灭菌或无菌处理，避免外源DNA污染

温度控制：酶、dNTP等试剂需-20℃储存，避免反复冻融

体系优化：根据引物Tm值、模板类型调整Mg²+浓度和退火温度

对照设置：每次实验需设置阴性对照（无模板）和阳性对照（已知阳性模板）