Bst 3.0 DNA/RNA聚合酶(32U/ul)无甘油 新品

基本信息‌

‌英文名称‌：Bst 3.0 DNA/RNA Polymerase (32U/ul, without glycerol)
作用机制：不仅具有DNA聚合酶的链置换活性，还具有反转录活性，可直接以RNA为模板合成cDNA，然后进行DNA的等温扩增。无甘油配方使其更适合冻干保存和一些对甘油敏感的实验体系。

适用样本：适用于同时涉及RNA反转录和DNA等温扩增的实验，如RNA病毒的检测、RNA样本的基因分析等，样本包括临床样本、环境样本、动植物组织等含RNA的样本。
产品概述
一款无甘油成分的多功能聚合酶，同时具备DNA聚合酶活性和反转录酶活性，可直接以RNA为模板合成cDNA并进行DNA扩增，实现一步法反转录-等温扩增。无甘油的配方避免了甘油对某些反应体系或下游实验的干扰，32U/ul的高浓度使其具有更强的催化能力，适用于RNA病毒检测、基因表达分析等需要同时处理RNA和DNA模板的等温扩增实验。
产品特点
双功能酶活性：同时具备DNA聚合酶和反转录酶活性，可直接以RNA为模板扩增

无甘油配方：避免甘油对某些反应体系或下游实验的干扰

高活性浓度：32U/ul的高浓度，催化效率更高

恒温优势：65℃恒温条件下高效反应，适用于等温扩增和RNA病毒检测
实验前准备

试剂与耗材检查：确认PCR预混液、上下游引物、模板DNA、无酶水等试剂在有效期内，外观无浑浊、沉淀；PCR管、枪头需为无酶无菌规格。

仪器预热：提前10-15分钟启动PCR仪，设置好反应程序，确保仪器达到预设温度。

环境准备：在超净工作台内操作，佩戴无粉手套，避免交叉污染；操作前用75%酒精擦拭台面和移液器。

反应体系配制

冰上操作：将所有试剂放置于冰盒内，避免酶失活。

体系配比（以25μL体系为例）：

PCR预混液（含Taq酶、dNTP、Buffer）：12.5μL

上游引物（10μM）：1μL

下游引物（10μM）：1μL

模板DNA：1-5μL（根据模板浓度调整）

无酶水：补足至25μL

轻柔混匀：用移液器轻轻吹吸混合液3-5次，避免产生气泡；若有气泡可短暂离心去除。

分装体系：将配制好的反应液分装至PCR管中，每管25μL，盖紧管盖。

PCR仪上机反应

程序设置：根据引物Tm值和实验需求设置三步法或两步法程序：

预变性：95℃，3-5分钟

循环阶段：95℃变性30秒，55-65℃退火30秒，72℃延伸（根据片段长度调整，1kb约1分钟），循环25-35次

终延伸：72℃，5-10分钟

保温：4℃。

上机运行：将PCR管放入PCR仪样品槽，确保管盖紧密贴合；启动程序，等待反应完成。

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注意事项

无菌操作：所有试剂和耗材需高压灭菌或无菌处理，避免外源DNA污染

温度控制：酶、dNTP等试剂需-20℃储存，避免反复冻融

体系优化：根据引物Tm值、模板类型调整Mg²+浓度和退火温度

对照设置：每次实验需设置阴性对照（无模板）和阳性对照（已知阳性模板）