pCold-SUMO-10His原核蛋白表达试剂盒 新品

基本信息‌

‌英文名称‌：pCold-SUMO-10His Prokaryotic Protein Expression Kit
作用机制：利用pCold载体的冷诱导表达特性，在低温条件下诱导目标蛋白的表达，同时SUMO标签可提高目标蛋白的溶解性和稳定性，10His标签便于后续的蛋白纯化。通过IPTG诱导，使重组质粒在原核细胞中表达带有SUMO和10His标签的目标蛋白。

适用样本：适用于在大肠杆菌中重组表达目标蛋白质，尤其适用于那些在常规温度下表达容易形成包涵体的蛋白，样本为大肠杆菌感受态细胞。
产品概述
一种用于原核生物（如大肠杆菌）中重组蛋白表达的试剂盒，包含pCold-SUMO-10His表达载体、感受态细胞、诱导试剂等组分。pCold-SUMO-10His载体带有冷休克启动子，可在低温条件下诱导蛋白表达，减少蛋白的错误折叠和聚集；同时融合了SUMO标签和10×His标签，SUMO标签可提高重组蛋白的可溶性和表达量，10×His标签便于后续的蛋白纯化。该试剂盒适用于难表达蛋白、易降解蛋白的原核表达，能高效获得可溶性的重组蛋白。
产品特点
冷休克表达：利用冷休克启动子，在低温下诱导蛋白表达，减少蛋白错误折叠

双标签融合：融合SUMO标签和10×His标签，提高蛋白可溶性和表达量

标签辅助纯化：10×His标签便于后续蛋白纯化，SUMO标签可提高蛋白可溶性

难表达蛋白适配：适用于难表达、易降解蛋白的原核表达，获得可溶性重组蛋白
操作步骤

一、样本准备

取1-5mL漱口水样本转移至15mL离心管中，12000rpm离心10分钟，弃上清，收集细胞沉淀。

二、细胞裂解

向离心管中加入200~400μL细胞裂解液，再加入15~20μL蛋白酶K溶液

涡旋震荡10秒充分混匀，将离心管放入75℃恒温震荡器中，900rpm恒温震荡裂解45分钟

裂解完成后短暂离心，将上清液转移至新的离心管中

三、DNA吸附

向裂解上清中加入等体积的结合缓冲液，轻轻颠倒混匀

将混合液全部转移至一次性吸附柱中，12000rpm离心30秒，弃收集管中的废液

向吸附柱中加入500μL漂洗液，12000rpm离心30秒，弃废液；重复此漂洗步骤1次

四、DNA洗脱

将吸附柱放回收集管，12000rpm离心2分钟，彻底去除残留漂洗液

将吸附柱转移至新的1.5mL离心管中，向吸附柱中心加入50~100μL洗脱缓冲液（可预热至65℃提升洗脱效率）

室温静置2分钟，12000rpm离心1分钟，离心管中的液体即为提取完成的基因组DNA

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使用建议

溶解与保存：建议以液体形式保存于-20℃，避免反复冻融。

反应条件：常规反应温度为37℃，灭活需50℃处理5分钟。

推荐用量：根据实验体系优化，通常每50μL反应体系添加0.1-1U。